您还没有挑选商品!
产品订购:sales@vazyme.com  技术支持:support@vazyme.com

AceQ保障qPCR实验的特异性

日期:2015年10月8日 16:11

客户信息南京大学某课题组

问题:客户在做qPCR实验时融解曲线有杂峰,认为是引物设计的问题,但在更换了引物后仍未解决。

解决方案:Vazyme销售员推荐特异性更好的AceQ qPCR体系,起初该同学抱着将信将疑的态度,但还是用Vazyme的试剂用3步法和2步法尝试扩增,并用另一种试剂做对比。实验结果证明,Vazyme的AceQ的qPCR mix能较好的抑制非特异性扩增,主动发来实验测试数据。

AceQ在保证非特异性扩增的同时能最大程度上保证qPCR的特异性,大大提高实验的成功率。

 

 

Vazyme Qmix与Abm Qmix的平行实验

 

实验体系: 模板为小鼠结肠cDNA  稀释10倍 ,100倍,1000倍

 

组分    

体积(μl)

SYBR QMIX

10

F (10 μM)

0.5

R (10 μM)

0.5

模板

1

ROX1(Abm的不用加)

0.4

ddH2O

to 20

 

 

3步法程序

       

 

 

2步法程序

       

 

上机结果如下

3步法 的actin    红的为Vazyme   蓝的为Abm

 

  扩增曲线

 

                           融解曲线

 

3步法 的TNF  绿的为Vazyme   紫的为Abm

 

扩增曲线

 

                         融解曲线

 

 

2步法 的actin    红的为Vazyme   蓝的为Abm

扩增曲线

 

                         融解曲线

 

2步法 的TNF  绿的为Vazyme   紫的为Abm

扩增曲线

 

                         融解曲线

 

 

结果分析:

①从结果可以看出,对于actin而言,不论是3步法还是2步法,Vazyme Qmix 的CT值和融解曲线的峰图均要好于Abm Qmix。

②对于TNF而言,3步法的时候,Vazyme Qmix 的CT值和融解曲线的峰图均要好于Abm Qmix;2步法的时候Abm Qmix的CT值虽然小,但是融解曲线有杂峰,数据不如Vazyme Qmix的可靠。

③从峰图来看,3步法要略好于2步法,可能是因为退火温度稍低而且延伸时间较为宽裕。

④在以前的实验中Vazyme Qmix部分表现不如Abm Qmix,可能是因为模板中有一些抑制物与Vazyme体系不兼容,也可能提的RNA中存在一些抑制物或者与逆转录体系不兼容。这次的模板是新提的小鼠结肠RNA逆转录得到的cDNA。

所属类别: qPCR系列

该资讯的关键词为:

地 址:江苏省南京市经济技术开发区红枫科技产业园C1-2栋     电 话:400-600-9335 邮 箱:sales@vazyme.com
 
Copyright 2015 Vazyme Biotech Co.,Ltd All rights reserved 版权所有-南京诺唯赞生物科技有限公司 备案号:苏ICP备12014779号