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HiScript II One Step RT-PCR Kit

货  号:
P611-01
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HiScript® II One Step RT-PCR Kit 

一步法高效RT-PCR 试剂盒

逆转录和PCR 在同一管内进行

检测灵敏度可达0.1 pg 总RNA

可扩增超过10 kb 的长片段

图1

A. 以Hela细胞总RNA为模板,用HiScript® II One Step RT-PCR Kit (P611) 扩增555 bp GAPDH片段。检测灵敏度可达到0.1 pg。

B. 以猪蓝耳病毒PRRSV RNA为模板,用HiScript® II One Step RT-PCR Kit (P611) 扩增660 bp片段。检测灵敏度可达到0.2 TCLD50。

C. 以1 μg Hela细胞总RNA为模板,用HiScript® II One Step RT-PCR Kit (P611)扩增不同长度的片段。可成功扩增长达12.1 kb的UTRN片段。

本试剂盒专为以RNA 为模板( 如RNA 病毒) 的终点法PCR 检测而设计。使用基因特异引物(GSP),逆转录和PCR 反应在一管内完成,不需要额外的开管/ 移液操作,大大提高了检测通量,并降低了污染的风险。整合HiScript® II Reverse Transcriptase以及Champagne TaqTM DNA Polymerase 的优越性能,配合经过优化的缓冲体系,HiScript® II One Step RT-PCR Kit 可扩增片段长达10 kb 以上。试剂盒以便捷的Master Mix 形式提供。2 × One Step Mix 包含优化的缓冲体系和dNTPs;One Step Enzyme Mix 包含比例优化的HiScript® II Reverse Transcriptase、RNase inhibitor 以及Champagne TaqTM plus DNA Polymerase,操作简单快捷。

组分

P611-01 50 rxn (50 ul/rxn)

RNase free ddH2O

1 ml×2

2×One Step Mixa

625 μl×2

One Step Enzyme Mixb

125 μl

10 ×Loading buffer

1.25 ml

a. 包含dNTP和缓冲体系

b. 包含HiScript® II Reverse Transcriptase、RNase inhibitor以及Champagne TaqTM plus DNA Polymerase

-30 ~ -15℃保存。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:如何选择采用一步法还是两步法进行RT-PCR?

A1:一步法即逆转录和PCR扩增在同一管内进行,不需要额外的开管/移液操作,大大提高了检测通量,并降低了污染的风险。由于得到的所有cDNA样品都用来扩增,所以灵敏度更高,最低可以达到0.01 pg总RNA。一步法使用基因特异性引物起始cDNA合成,所以投入什么引物就逆转出相应的cDNA产物,得不到中间产物cDNA。更适用于特定基因的检测、较少的组织样本、具有大量模板待检测等情况。

两步法即逆转录和PCR扩增分两步进行,首先从RNA模板逆转录得到cDNA,得到的cDNA再进行一次或多次不同的PCR反应。两步法可以使用通用型逆转录(oligo dT或随机引物)引导cDNA第一链合成,可以逆转出所有mRNA的信息。后续实验可以方便进行多个基因的检测。

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