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miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)

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  • 诺唯赞miRNA引物设计软件使用说明书.pdf

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  • MR101-说明书.pdf

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    2020-06-29 19:15:03
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miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)

miRNA1stStrandcDNASynthesisKit(bystem-loop)  microRNA逆转录产品(茎环法) ·优秀的线性关系 在宽广的模板区间内具有良好的线性关系,可检出低至pg级RNA模板·优越的反应体系  最适的Buffer组分及浓度,更适用于microRNA的逆转录 ·简便的引物设计 提供配套的引物设计软件,使得引物设计更加简便 优秀的线性关系 以小鼠肝脏组织TotalR
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MR101-01/02
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-
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产品详情
FAQ
组分
说明书

miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop)

microRNA 逆转录产品(茎环法)

优秀的线性关系:在宽广的模板区间内具有良好的线性关系,可检出低至pg 级RNA 模板

优越的反应体系:最适的Buffer 组分及浓度,更适用于microRNA 的逆转录

简便的引物设计:提供配套的引物设计软件,使得引物设计更加简便

以小鼠肝脏组织Total RNA 的10 倍稀释梯度(10 pg-1 μg) 为模板,使用miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) (Vazyme #MR101) 进行逆转录,得到的cDNA 使用miRNA Universal SYBR ® qPCR Master Mix (Vazyme #MQ101)扩增mmu-miR-16 基因。结果显示,在宽广的模板区间内,该配套产品具有优秀的线性关系。

miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) 是适用于茎环法miRNA cDNA 一链合成的专用试剂盒,含基因组DNA 去除步骤,可以在42℃2 min 条件下快速去除基因组DNA 的污染,保证后续结果更加可靠。试剂盒基于的HiScript ® II Reverse Transcriptase 具有极高的热稳定性,配以针对优化的缓冲体系,均有利于miRNA 特异性逆转录产物的生成。cDNA 产物后续定量,推荐使用本公司的miRNA Universal SYBR ® qPCR Master Mix (Vazyme # MQ101),以获得最优的实验结果。同时,配套推出miRNA逆转录茎环引物和定量引物的设计软件,操作简单,为miRNA 实验保驾护航。

组分

MR101-01

(50 rxn / 20 μl reaction)

MR101-02

(100 rxn / 20 μl reaction)

RNase free dd2O

1 ml

1 ml

5 × gDNA Wiper Mix

100 μl

200 μl

10 × RT Mixa

100 μl

200 μl

HiScript II Enzyme Mix b

100 μl

200 μl

a. 包含dNTP。

b. 包含RNase inhibitor。

-20℃保存。

关键词:
MR101-01/02
microRNA逆转录产品(茎环法)
MR101
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Q1、采用其他软件设计的茎环逆转录引物及定量引物,能否使用Vazyme #试剂盒(MR101+MQ101)?

A1:可以的。逆转录时可参照说明书直接投入其他软件设计的茎环逆转录引物(2μM浓度),且后续定量实验直接投入相应的定量上下游引物即可。注:若其他软件默认的茎环引物与Vazyme miRNA 引物软件默认的相同,后续搭配MQ101无需合成反向引物,可以使用MQ101自带的mQ Primer R;若茎环引物序列不同,则MQ101提供的mQ Primer R无需使用,需合成正反向引物。

Q2、内参是否需要设计茎环引物及如何逆转录和定量的引物如何使用?

A2:若选择U6等较长的基因作为内参基因,由于序列相对较长,无需设计茎环逆转录引物,直接使用常用的Primer Premier 5等软件设计即可,逆转录时投入内参下游引物(2μM浓度),且后续定量实验直接投入内参的上下游引物即可。如果选择长度较短的miRNA作为内参,需要设计茎环引物进行逆转录,推荐使用Vazyme miRNA 引物设计软件设计逆转录引物和qPCR引物。

Q3、如果要研究多个miRNA定量实验,是不是每个miRNA均要单独设计一条茎环引物进行逆转录?

A3:是的,针对每个miRNA都要设计一条茎环逆转录引物,一管反应中只能逆转一个miRNA(内参也是一样),即不同逆转录引物均需要分管逆转录。

Q4、在逆转录时,多个茎环逆转录引物/内参引物是否可以在同一管中进行?

A4:不推荐。在一管中同时投入多个茎环逆转录引物进行多个miRNA逆转录时,不同特异性茎环引物茎环结构之间会产生相互干扰和影响。

Q5、逆转录体系应该投入多少RNA?

A5:如果提取的是Total RNA,MR101可以兼容10 pg-1 μg的RNA投入量,但是不同miRNA表达丰度不同,建议尽量投入0.5-1 μg RNA。如果提取的是miRNA,逆转投入量参考1/10-1/5 total RNA的量加入,具体还是要根据目标miRNA的丰度来调整。

Q6、miRNA为什么要合成茎环引物?

A6:因为miRNA较短,如果使用普通逆转录和定量方法,无法设计定量引物,需要在逆转录阶段将cDNA延长

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