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FastPure Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit

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    FastPure Cell Tissue Total RNA Isolation Kit...V20.1.pdf

    大小:
    2020-09-07 16:37:32
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6504

FastPure Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit

面面俱到,高品质提取试剂帮你搞定细胞/动物组织总RNA提取
价格:
¥
1120.0
市场价
1120.0
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货号:
RC101
所属分类
柱式提取
数量:
-
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FastPure Cell/Tissue Total RNA Isolation Kit 

面面俱到,高品质提取试剂帮你搞定细胞/动物组织总RNA提取

动物组织/细胞总RNA提取;产物可用于RT-PCR;Real-Time PCR;芯片分析

  • 基因组残留少: 配有基因组DNA吸附柱和DNase膜上消化模块,可有效去除DNA污染
  • 简单快速: 无需配备其他试剂、无需酚/氯仿抽提、常温操作即可
  • 通用性强: 适用于多种不同类型的细胞、组织RNA的提取

 

分别使用Vazyme #RC101和T公司同类试剂提取2 × 106 个293T细胞总RNA,使用100 μl洗脱体积,取1 ul提取产物进行琼脂糖凝胶电泳。从图中可以看出,Vazyme #RC101提取RNA浓度高于T公司同类产品。

试剂盒基于硅胶柱纯化技术,可从动物细胞或组织中快速提取总RNA。试剂盒无需使用酚/氯仿抽,同时配有基因组DNA吸附柱和DNase膜上消化模块,可有效去除DNA污染。得到的总RNA纯度高,无蛋白和其他杂质污染,全程仅需30 min。

DNase I置于-20℃保存;

Buffer RL1在加入β-巯基乙醇后,可在4℃保存1个月;

其余组分均可在常温(15-25℃)干燥条件下保存。

关键词:
RC101
动物组织总RNA提取
细胞总RNA提取
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动物RNA提取
动物组织总RNA快速提取
提取
细胞总RNA快速提取
柱式RNA提取
核酸提取
RNA提取
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Q1:RNA提取得率低

A1:(1) 样本保存不当或者样本保存时间过久:样本保存不当或者保存时间过长都有可能导致RNA的降解,采集新鲜样本或经过液氮速冻后保存于-70℃或液氮中的样本;

       (2) 匀浆或者液氮研磨不充分:匀浆或者液氮研磨不充分,裂解不充分,导致RNA的释放不充分;

       (3) 组织或者细胞中RNA含量偏低:不同细胞和组织中 RNA 的丰度不同,需做预实验确定合适的样品起始量;

       (4) 组织起始量太少或者太多:样品量过少,则细胞组织中RNA含量较低;样品量过多则可能超过裂解液的裂解能力,裂解将不完全,从而导致RNA得率低或质量下降;

       (5) 洗脱不充分:RNase-free ddH2O滴加到纯化柱膜中央。纯化柱的洗脱体积为50-200 μl,若洗脱效果不理想,可以加入在65℃预热的RNase-free ddH2O后,延长室温放置时间,离心后进行第二次洗脱。

 

Q2:gDNA-Filter Columns堵塞问题

A2:(1) 样品用量太多:本试剂盒适用于提取10-20 mg动物组织或者2-5×106个细胞,超量的组织会降低产量以及纯度,操作时应减少样本使用量;

        (2) 样品富含肌纤维:肌肉、心脏以及皮肤等富含肌纤维,肌纤维的分子量大,会引起柱子堵塞,样本处理时采用液氮研磨方式会降低堵柱现象;

        (3) 组织研磨或者匀浆不充分:研磨或者匀浆不充分时,碎片有可能导致柱堵塞,将裂解后的液体先进行 13,000×g 离心5 min,取上清再加入gDNA-Filter Columns。

 

Q3:RNA降解

A3:纯化后的RNA降解与样本质量、是否被RNase污染、操作方式等因素有关:

(1) 样本因为没有及时保存,导致RNA降解:组织样本或者细胞在收集后若不及时进行后续实验,液氮速冻后于-80℃保存;

(2) 样本反复冻融:组织样本保存时,分小块保存,避免因反复冻融导致样本降解;

(3) 电泳原因:常见的RNA降解现象部分因为电泳过程引起的,电泳前将电泳槽用3%双氧水浸泡20 min,之后用RNase-free ddH2O进行冲洗,电泳缓冲液用RNase-free ddH2O配置;

(4) 确保提取过程中使用的枪头和离心管均为RNase-free。

 

Q4:提取的RNA有基因组DNA污染

A4:不同种类组织细胞DNA、RNA含量相差很大,请勿超过20 mg组织和5×106细胞。如肝脏、脾脏和肾脏DNA含量丰富,请勿超过10 mg,否则会导致基因组残留过多。gDNA-Filter Columns能够有效去除体系中大部分DNA,如果下游实验对微量DNA十分敏感,可根据具体情况选择选择使用以下方案:

(1) 使用试剂盒提供的DNase I进行膜上消化清除DNA污染;

(2) 设计引物时选用跨内含子的引物,从而避免基因组DNA模板参与扩增反应;

(3) 逆转录时选择含有基因组去除模块的逆转录试剂。

 

Q5:RC101中是否可以使用DTT来替代巯基乙醇

A5:可以;1%巯基乙醇可以用终浓度为4M的DTT(DEPC水配置)替代。

 

Q6:RC101中的RNA柱可承载多少RNA量

A6:可承载100-150μg左右。

 

Q7:使用RC101试剂提取RNA,是否可以在4°C离心?

A7:RC101试剂盒是在常温下离心操作;不建议在4°C离心,因为试剂中含有高盐组分,在低温下易引起结晶。

 

Q8:RC101里DNase I使用完,是否可以使用EN401里的DNase I

A8:不可以,RC101中的DNaseI主要是用于膜上DNA消化的,EN401适用产物消化。

 

 

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