Phanta Super-Fidelity DNA Polymerase_诺唯赞——用科技改善人类健康生活

Phanta^® Super-Fidelity DNA Polymerase

卓越保真度和扩增能力的高保真DNA 聚合酶

保真度是Taq DNA Polymerase的52倍，是Pfu DNA Polymerase的6倍

扩增速度是常规聚合酶的4-150倍

广泛的模板适应性

优化的缓冲体系广泛适用于各种类型模板，便于快速得到理想的扩增结果

图1

使用Phanta^®Super-Fidelity DNA Polymerase以λ DNA为模板扩增长度分别为200 bp、600 bp、800 bp、1 kb、1.2 kb、2.0 kb的目标片段，延伸时间设置为1秒。所有片段均可以实现特异性高产量扩增。

图2

使用Phanta^®Super-Fidelity DNA Polymerase以λ DNA为模板扩增长度分别为5 kb、8 kb、10 kb、12 kb、15 kb的目标片段，延伸时间设置为3分钟。所有片段均可以实现特异性高产量扩增。

图3

使用LacI法测定，Phanta^®保真性是普通Taq DNA聚合酶的52倍，是野生型Pfu DNA聚合酶的6倍。

(Cline et al. , Nucleic Acids Research，24: 3546-3551(1996))

Phanta^® Super-Fidelity DNA Polymerase是一种基于Pfu DNA Polymerase改造而成的新一代超保真DNA聚合酶，具有极高的扩增效率和广泛的模板适应性，可用于几乎所有PCR反应。经过对Pfu DNA Polymerase的基因工程改造，Phanta^® Super-Fidelity DNA Polymerase的行进性(processivity)得到了大幅度提升，即使是非常复杂的模板，也能准确快速的完成反应。其错配率是普通Taq酶的1/52,是Pfu酶的1/6，且其扩增速度可以达到15秒/kb。5 × Phanta^® SF反应缓冲液对于简单或复杂模板、短片段或长片段PCR扩增都具有良好的适应性。缓冲液中已经含有10 mM Mg²⁺(1 × 终浓度为2 mM)，可以使用随酶提供的DMSO或MgSO₄对反应体系进行优化。附带的PCR Enhancer可有助于高GC含量片段的扩增。

组分	P501-d1（100U）	P501-d2（500U）	P501-d3（1000U）
5 × SF Buffer (with 10 mM MgSO₄)	1.25 ml	5×P501-d1	10×P501-d1
25 mM MgSO₄	1 ml
dNTP Mix (10 mM each)	100 μl
Phanta^®Super-Fidelity DNA Polymerase(1U/μl)	100 μl
5 × PCR Enhancer	500 μl
DMSO	100 μl
10 × Loading buffer	1.25 ml

-20°C保存

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Q1：扩增效率低，实验组无扩增条带。

A1：(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解；引物设计是否合理，可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开，此时加入PCR Enhancer（货号P021），可以有效降低解链温度；模板的AT含量过高，可尝试使用针对高AT的产品（货号P501/P511）；模板为粗品，存在抑制物，建议降低模板浓度（稀释使用；若样本为植物叶片，要确保植物为非多糖多酚植物，取新鲜幼嫩的叶片，并将叶片面积剪小，如黄枪头尖部面积大小）；若模板为cDNA，要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

(3) 酶

反应所用的酶因保存或运输不当而失活，建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误，建议重复实验。

(5) 反应程序

检查变性温度是否准确，PCR仪指示温度与实际温度是否相符，如果温度过高，酶在前几个循环就迅速失活，温度过低则模板变性不彻底；若模板为酵母菌，可将预变性时间延长10min；退火温度不合适，可对退火温度设置梯度，摸索最佳的退火温度；如果目的片段较长，可尝试Touch Down 程序；检查延伸时间是否充足。

(6) Mg²⁺浓度不合适

Mg²⁺浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败；Mg²⁺浓度过高会降低PCR的特异性，应适当调整Mg²⁺浓度。

Q2：扩增的条带亮度不太亮。

A2：(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解。

(2) 模板

首先确认模板的质量，长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；如果模板没有了，可用首次扩增产物按倍比稀释后作为模板进行二次扩增。

(3) 酶

可适当提高酶的使用量。

(4) 反应程序

可尝试使用Touch Down程序；延长延伸时间，提高循环数。

Q3：扩增特异性差，非特异性扩增。