Phanta EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase_南京诺唯赞生物科技有限公司

Phanta^® EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase

超高保真度的热启动DNA聚合酶

添加了单克隆抗体，可进行高特异性的热启动PCR

保真度是Taq DNA Polymerase 的69 倍，是Pfu DNA Polymerase 的8 倍

扩增速度是常规聚合酶的4-150 倍

优化的缓冲体系广泛适用于各种类型模板

提供PCR Enhancer 以帮助扩增高GC 含量的模板

Phanta^® EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase是Phanta^®HS Super-Fidelity DNA Polymerase的升级版本。Phanta^® EVO HS 中添加了独特的延伸因子，并对反应体系进行了深度优化，使其扩增稳定性、保真度以及对长片段的扩增能力得到了进一步提升。

组分	P504-d1 100 U	P504-d3 1,000 U
Phanta^® EVO HS Super-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μl)	100 μl	10 × P504-d1
5 × EVO Buffer (with 10 mM MgCl₂)	1 × 1.25 ml
25 mM MgCl₂	1 ml
dNTP Mix (10 mM each)	100 µl
5 × PCR Enhancer	500 µl
10 × Loading buffer	1.25 ml

-20°C保存

未找到相应参数组，请于后台属性模板中添加

Q1：扩增效率低，实验组无扩增条带。

A1：(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解；引物设计是否合理，可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开，此时加入PCR Enhancer（货号P021），可以有效降低解链温度；模板的AT含量过高，可尝试使用针对高AT的产品（货号P501/P511）；模板为粗品，存在抑制物，建议降低模板浓度（稀释使用；若样本为植物叶片，要确保植物为非多糖多酚植物，取新鲜幼嫩的叶片，并将叶片面积剪小，如黄枪头尖部面积大小）；若模板为cDNA，要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

(3) 酶

反应所用的酶因保存或运输不当而失活，建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误，建议重复实验。

(5) 反应程序

检查变性温度是否准确，PCR仪指示温度与实际温度是否相符，如果温度过高，酶在前几个循环就迅速失活，温度过低则模板变性不彻底；若模板为酵母菌，可将预变性时间延长10min；退火温度不合适，可对退火温度设置梯度，摸索最佳的退火温度；如果目的片段较长，可尝试Touch Down 程序；检查延伸时间是否充足。

(6) Mg²⁺浓度不合适

Mg²⁺浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败；Mg²⁺浓度过高会降低PCR的特异性，应适当调整Mg²⁺浓度。

Q2：扩增的条带亮度不太亮。

A2：(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解。

(2) 模板

首先确认模板的质量，长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解，应使用新鲜制备的DNA双链作为模板；如果模板没有了，可用首次扩增产物按倍比稀释后作为模板进行二次扩增。

(3) 酶

可适当提高酶的使用量。

(4) 反应程序

可尝试使用Touch Down程序；延长延伸时间，提高循环数。

Q3：扩增特异性差，非特异性扩增。