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2×Taq Plus Master Mix Ⅱ(Dye Plus)

科学研究试剂

高通量测序文库构建试剂

药物研发试剂

  • P213-说明书-V9.1.pdf

    大小:
    2020-06-30 23:23:15
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2×Taq Plus Master Mix Ⅱ(Dye Plus)

2×TaqPlusMasterMixⅡ(DyePlus)  比普通Taq酶具有更高的扩增效率和保真度的DNA聚合酶   扩增能力强:对于绝大多数模板和引物,产量明显提高;可视度高:PCR反应结束进行琼脂糖凝胶电泳加样时,样品颜色更加清晰;操作便捷:加入引物和模板即可进行扩增,无需冰上操作,产物含有染料可直接进行电泳; 稳定性好:反复冻融50次活性未见明显降低   图一模板兼容性广 以人基因组DNA
价格:
¥
290.0
市场价
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货号:
P213-01/02/03
所属分类
高产量PCR
数量:
-
+
库存:
89991
暂时无货
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产品详情
FAQ
组分
说明书

2×Taq Plus Master Mix Ⅱ(Dye Plus)

比普通Taq 酶具有更高的扩增效率和保真度的DNA 聚合酶

扩增能力强:对于绝大多数模板和引物,产量明显提高;

可视度高:PCR反应结束进行琼脂糖凝胶电泳加样时,样品颜色更加清晰;

操作便捷:加入引物和模板即可进行扩增,无需冰上操作,产物含有染料可直接进行电泳;

稳定性好:反复冻融50次活性未见明显降低

图1.模板兼容性广

以人基因组DNA、鼠基因组DNA、小麦基因组DNA、水稻基因组DNA、菌液、λDNA分别为模板扩增0.5-15 kb片段,均可得到单一的相应条带,具有极广的模板兼容性。

图2.扩增能力强

以水稻基因组DNA、HeLa cDNA、小鼠基因组DNA为模板,分别扩增长度为0.5k、1k、3k的目的片段。2×Taq Plus Master Mix Ⅱ(Dye Plus)相比于T公司、Q公司和K公司的Taq Mix产品,具有更强的扩增能力,产量更高,适用范围更广。

1:2×Taq Plus Master Mix Ⅱ(Dye Plus);

2、3、4:分别为三种来自于T公司、Q公司和K公司的Taq Mix产品;

-:阴性对照。

本产品包含Taq Plus DNA Polymerase、dNTP以及优化的缓冲体系,适用于高产量PCR反应。相比于普通PCR,具有更高的保真度、更强的扩增性能和产量,可用于10 kb以内以基因组为模板的PCR扩增以及15 kb以内以质粒和λDNA为模板的PCR扩增。预先配制的2 × Taq Plus Master Mix II用于PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增,减少了移液操作,提高了检测通量和结果的重现性。扩增体系中加入的保护剂使得2 × Taq Plus Master Mix II反复冻融后仍可保持稳定的活性。本品含有蓝色双染料,可在反应结束后直接进行电泳, 使用方便。PCR产物的3’端带A,可直接克隆至T载体,并适用于ClonExpress® 快速克隆试剂盒(C112/C113/C115/C601)。

组分

P213-01

P213-02 

P213-03 

2 × Taq Plus Master Mix II(Dye Plus)

5×1ml

15×1ml

50×1ml

-20°C

 

关键词:
P213-01/02/03
比普通Taq酶具有更高的扩增效率和保真度的DNA聚合酶
比普通Taq酶具有更高的扩增效率和保真度的DNA聚合酶
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Q1:扩增效率低,实验组无扩增条带。

A1:(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解;引物设计是否合理,可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开,此时加入PCR Enhancer(货号P021),可以有效降低解链温度;模板的GC含量过低会导致扩增效率较差,可适当延长引物长度或通过梯度PCR摸索合适的反应条件;模板中存在抑制物,特别是甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,会造成DNA脱嘌呤而影响PCR结果,建议稀释使用或重新制备;若模板为cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

(3) 酶

反应所用的酶因保存或运输不当而失活,建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误,建议重复实验。

(5) 反应程序

检查变性温度是否准确,PCR仪指示温度与实际温度是否相符。如果温度过高,酶在前几个循环就迅速失活;温度过低则模板变性不彻底。可对退火温度设置梯度,摸索最佳的退火温度。检测延伸时间是否充足。

(6) Mg2+浓度不合适

Mg2+浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败;Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性,应适当调整Mg2+浓度。

Q2:扩增特异性差,非特异性扩增。

A2:(1) 引物

引物设计不够优化。引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体,可降低引物浓度进行优化,必要时重新设计引物。

(2) 模板

模板不纯,被污染,需重新制备模板。

模板降解或过量,通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新纯化模板。模板的使用量请参考说明书。

(3) 反应程序

反应程序不够优化。如果出现比目的条带小的杂带,可通过提高退火温度,降低循环数调整;如果出现比目的条带大的杂带,可缩短延伸时间、降低循环数。

(4) 酶

酶量加入过多。

Q3:扩增产物跑胶条带弥散或拖尾。

A3:(1) 胶

制胶时要使胶完全融化。

(2) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解。

(3) 模板

模板降解或过量,可通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新制备模板。模板的使用量请参考说明书。如果目的条带较长,模板是cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度,逆转录时不加随机引物重新逆转录。

(d) 反应程序

反应程序不够优化。退火温度不合适,可对退火温度设置梯度,摸索最佳的退火温度;尝试Touch Down 程序。

(e) 酶

酶量加入过多。

Q4:空白对照出现扩增产物。

A4:(1) 引物设计不合理

扩增序列与非目的扩增序列有同源性,PCR也可以扩增出非靶序列的序列。

(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致,说明有污染

更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

(3) 为了避免靶序列受到整个基因组或大片段的交叉污染,操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

(4) 为了避免靶基因受到空气中小片段核酸污染,可用巢式PCR方法减轻或消除污染。

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