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    2020-06-30 23:23:36
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2 × Rapid Taq Master Mix

2×RapidTaqMasterMix  速度与性能,并驾齐驱  扩增速度快:15sec/kb,1kb以内极限扩增速度可达1sec/kb操作便捷:加入引物和模板即可进行扩增,无需冰上操作,产物含有染料可直接进行电泳 稳定性好:反复冻融50次,活性未见明显降低  图一扩增速度可达1sec/kb 以人基因组DNA、人cDNA、鼠基因组DNA、小麦基因组DNA、水稻基因组DNA、菌液、菌落、λDNA分别
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货号:
P222-01/02/03/04
所属分类
快速PCR
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说明书

2 × Rapid Taq Master Mix

速度与性能,并驾齐驱

扩增速度快:15 sec/kb,1 kb 以内极限扩增速度可达1 sec/kb

操作便捷:加入引物和模板即可进行扩增,无需冰上操作,产物含有染料可直接进行电泳

稳定性好:反复冻融50 次,活性未见明显降低

图1.扩增速度可达1 sec/kb

以人基因组DNA、人cDNA、鼠基因组DNA、小麦基因组DNA、水稻基因组DNA、菌液、菌落、λDNA 分别为模板扩增1-2 kb 片段,延伸时间仅设置为1 sec/kb,PCR 反应结束后取10 ul 进行电泳检测。

图2.扩增特异性强,产量高

以人基因组和水稻基因组DNA为模板,分别扩增长度为2 kb、3.3 kb 的目的片段,延伸时间分别设置为30 s、60 s,PCR 反应结束后取10 ul 进行电泳检测。可见2 × Rapid Taq Master Mix 具有优异的扩增性能、极高特异性和产量优势。

本产品包含Taq DNA Polymerase、延伸促进因子、dNTP以及优化的缓冲体系,扩增速度可达15 sec/kb,适用于快速PCR反应,1 kb以内的极限扩增速度可达1 sec/kb,大幅节省PCR反应时间。预先配制的2 × Master Mix用于PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增,减少了移液操作,提高了检测通量和结果的重现性。本品扩增性能优,保存稳定性高,适用于5 kb以内以基因组为模板的PCR扩增以及10 kb 以内以质粒和λDNA为模板的PCR扩增。扩增体系中加入的保护剂使得2 × Master Mix反复冻融后仍可保持稳定活性。本品含有电泳缓冲液和绿色染料,可在反应结束后直接进行电泳,使用方便。PCR产物的3’端带A,可直接克隆至T载体。

组分

P222-01 

P222-02 

P222-03 

P222-04

2 × Rapid Taq Master Mix

5 × 1 ml

15× 1 ml

50× 1 ml

10× 5 ml

-20℃保存;解冻后4℃可存放3个月。

关键词:
P222-01/02/03
速度与性能,并驾齐驱
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Q1:扩增效率低,实验组无扩增条带。

A1:(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解;引物设计是否合理,可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开,此时加入PCR Enhancer(货号P021),可以有效降低解链温度;模板的GC含量过低会导致扩增效率较差,可适当延长引物长度或通过梯度PCR摸索合适的反应条件;模板中存在抑制物,特别是甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,会造成DNA脱嘌呤而影响PCR结果,建议稀释使用或重新制备;若模板为cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

(3) 酶

反应所用的酶因保存或运输不当而失活,建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误,建议重复实验。

(5) 反应程序

检查变性温度是否准确,PCR仪指示温度与实际温度是否相符。如果温度过高,酶在前几个循环就迅速失活;温度过低则模板变性不彻底。可对退火温度设置梯度,摸索最佳的退火温度。检测延伸时间是否充足。

(6) Mg2+浓度不合适

Mg2+浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败;Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性,应适当调整Mg2+浓度。

Q2:空白对照出现扩增产物。

A2:(1) 引物设计不合理

扩增序列与非目的扩增序列有同源性,PCR也可以扩增出非靶序列的序列。

(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致,说明有污染

更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

(3) 为了避免靶序列受到整个基因组或大片段的交叉污染,操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

(4) 为了避免靶基因受到空气中小片段核酸污染,可用巢式PCR方法减轻或消除污染。

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