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Green Taq Mix (with ddH2O)
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Green Taq Mix (with ddH2O)

货  号:
P131-w1/w2/w3
价  格:
¥
288.00
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Green TaqTM Mix (with ddH2O)

扩增性能极强的DNA 聚合酶

模板适应性强,可兼容多种复杂模板

优化的缓冲体系,有效抑制非特异性扩增

带绿色染料,反应结束后产物可直接进行电泳

以烟草、棉花、小麦、水稻、拟南芥、大豆、人的基因组,HeLa 细胞 cDNA,菌液和小鼠裂解液为模板扩增 0.5kb-3.3 kb 的目的片段,在默认条件下,所有片段均可实现高效扩增。 Green Taq Mix 对不同的模板都有较好的兼容性

本产品是一款包含Taq DNA Polymerase、dNTP 以及优化缓冲体系的2 × Master Mix,只需加入引物和模板即可进行反应,减少了移液操作引起的误差,同时提高了通量和结果的重现性。经过优化的缓冲体系能够有效抑制非特异性扩增和引物二聚体的产生。体系中加入的保护剂使得Mix 经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。本品中含有绿色染料,可在反应结束后直接进行电泳。PCR 产物的3’ 端带A,可克隆至T 载体,并适用于ClonExpress® 快速克隆试剂盒(C112/C113/C115/C601)。

组分 P131-w1 P131-w2 P131-w3
Green Taq Mix 5 ml 15 ml 50 ml
ddH2O 5 ml 15 ml 50 ml

-20℃保存。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:扩增效率低,实验组无扩增条带。

A1:(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解;引物设计是否合理,可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开,此时加入PCR Enhancer(货号P021),可以有效降低解链温度;模板的GC含量过低会导致扩增效率较差,可适当延长引物长度或通过梯度PCR摸索合适的反应条件;模板中存在抑制物,特别是甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,会造成DNA脱嘌呤而影响PCR结果,建议稀释使用或重新制备;若模板为cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

(3) 酶

反应所用的酶因保存或运输不当而失活,建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。

(4) 扩增体系

反应体系配制错误,建议重复实验。

(5) 反应程序

检查变性温度是否准确,PCR仪指示温度与实际温度是否相符。如果温度过高,酶在前几个循环就迅速失活;温度过低则模板变性不彻底。可对退火温度设置梯度,摸索最佳的退火温度。检测延伸时间是否充足。

(6) Mg2+浓度不合适

Mg2+浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败;Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性,应适当调整Mg2+浓度。

Q2:扩增的条带亮度不太亮。

A2:(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解。

(2) 模板

首先确认模板的质量,长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;如果模板没有了,可用首次扩增产物按倍比稀释后作为模板进行二次扩增。

(3) 酶

可适当提高酶的使用量。

(4) 反应程序

可尝试使用Touch Down程序;延长延伸时间,提高循环数。

Q3:扩增特异性差,非特异性扩增。

A3:(1) 引物

引物设计不够优化。引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体,可降低引物浓度进行优化,必要时重新设计引物。

(2) 模板

模板不纯,被污染,需重新制备模板。

模板降解或过量,通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新纯化模板。模板的使用量请参考说明书。

(3) 反应程序

反应程序不够优化。如果出现比目的条带小的杂带,可通过提高退火温度,降低循环数调整;如果出现比目的条带大的杂带,可缩短延伸时间、降低循环数。

(4) 酶

酶量加入过多。Taq系列:50μl体系加2U。

Q4:空白对照出现扩增产物。

A4:(1) 引物设计不合理

扩增序列与非目的扩增序列有同源性,PCR也可以扩增出非靶序列的序列。

(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致,说明有污染

更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

(3) 为了避免靶序列受到整个基因组或大片段的交叉污染,操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

(4) 为了避免靶基因受到空气中小片段核酸污染,可用巢式PCR方法减轻或消除污染。

暂未实现,敬请期待
暂未实现,敬请期待
货  号
C301-01
货  号
C601-01/02
货  号
MD101-01/02