2 × Vazyme LAmp Master Mix
长距离PCR 的明灯
菌落PCR;长片段PCR;基因型鉴定
· 高效扩增>20 kb 的基因组片段
· 高的扩增灵敏度,对于低纯度模板具有较强的耐受度
· 广泛的GC 适应性
· 提供即用型的预混液,较大程度地减少实验步骤
图1. 高的扩增性能
以10 ng不同种属的基因组DNA为模板,用Vazyme LAmp DNA Polymerase扩增长度为3.6-21.0 kb的目的片段。
M. DL15000 Marker(Vazyme #MD103)
图2. 较强的扩增灵敏度
以500 ng-0.5 ng 的棉花基因组DNA 为模板,扩增11.5kb、17.2 kb 的片段。PCR 反应结束后取10 ul 进行电泳检测。
图3. 广泛的模板适用性
以10 ng 人、水稻、大豆、棉花基因组DNA为模板,扩增3.6 kb-21 kb 的片段,PCR 反应结束后取10 ul 进行电泳检测。
图4. 广泛的GC含量适应性:可以扩增GC含量27%至78%的不同片段
以10 ng的人基因组为模板,用Vazyme LAmp DNA Polymerase分别扩增GC含量27%至78%的不同片段。
本产品是Taq酶与一种含有3’→5’外切酶活性的蛋白组成的混合酶,保真度是Taq酶的6倍,适合长片段的扩增,可从基因组中扩增长达21kb的片段,并且对不同来源、不同长度的模板均具有很高的扩增效率。PCR产物的3’端带A,可克隆至T载体。
-20℃保存。
Q1:扩增效率低,实验组无扩增条带。
A1:(1) 引物
检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解;引物设计是否合理,可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。
(2) 模板
长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开,此时加入PCR Enhancer(货号P021),可以有效降低解链温度;模板的GC含量过低会导致扩增效率较差,可适当延长引物长度或通过梯度PCR摸索合适的反应条件;模板中存在抑制物,特别是甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,会造成DNA脱嘌呤而影响PCR结果,建议稀释使用或重新制备;若模板为cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度,逆转录时只用引物Oligo dT。
(3) 酶
反应所用的酶因保存或运输不当而失活,建议更换新酶或用另一来源的酶重新实验。
(4) 扩增体系
反应体系配制错误,建议重复实验。
(5) 反应程序
检查变性温度是否准确,PCR仪指示温度与实际温度是否相符。如果温度过高,酶在前几个循环就迅速失活;温度过低则模板变性不彻底。可对退火温度设置梯度,摸索合适的退火温度。检测延伸时间是否充足。
(6) Mg2+浓度不合适
Mg2+浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败;Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性,应适当调整Mg2+浓度。
Q2:模板是cDNA,可以用来扩长片段吗?
A2:可以,但要保证cDNA确实有这样的长度,即RNA质量必须要好,逆转录时只用引物Oligo dT。
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