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    2020-12-08 16:55:17
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FastPure EndoFree Plasmid Maxi Kit

FastPureEndoFreePlasmidMaxiKit产量高对各种质粒兼容性好内毒素含量极低,后续可做转染级别实验稳定性好图1用FastPureEndofreePlasmidMaxiKit试剂盒提取大小为3.0kb、5.0kb、5.9kb、21.5kb不同大小的质粒,1%琼脂糖胶电泳检测,MDL5000DNAMarker(Vazyme#MD102)。结果显示本试剂盒针对不同大小的质粒均具有较
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DC202
所属分类
质粒DNA提取
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说明书

FastPure® EndoFree Plasmid Maxi Kit

质粒大提试剂盒

产量高

兼容不同长度质粒的提取

内毒素含量极低,后续可做转染级别实验

稳定性好

图1

用FastPure® Endofree Plasmid Maxi Kit试剂盒提取大小为3.0 kb、5.0 kb、5.9 kb 、21.5kb不同大小的质粒,1%琼脂糖胶电泳检测,ML:DL15000 DNA Marker(Vazyme #MD103)。结果显示本试剂盒针对不同大小的质粒均具有较好的提取效果,产量高。

图2

使用 FastPure® Endofree Plasmid Maxi Kit 提取的M3K的质粒进行酶切验证,1%琼脂糖胶电泳检测,M:DL5000 DNA Marker (Vazyme # MD102)。结果显示提取的质粒纯度高,对下游酶切反应无抑制作用。

本试剂盒适用于提取150-300ml过夜培养的菌液,采用改进的SDS-碱裂解法裂解菌体,粗提物通过独特的内毒素清除剂,选择性结合离心去除内毒素。独特工艺配方清除内毒素,内毒素含量极低(<0.1 EU/μg DNA),细胞转染效果极佳。提取过程无需使用有毒的苯酚,氯仿等试剂,也无需乙醇沉淀,本试剂盒可快速提取0.2-1.5mg 纯净的高拷贝质粒DNA ,提取率达80-90%。提取质粒可直接用于酶切、PCR、体外转录、转化、测序、等各种分子生物学实验

组分

DC202-01 (10 rxn)

RNase A

750 μl

Buffer P1

75 ml

Buffer P2

75 ml

Buffer P4

75 ml

内毒素清除剂

25 ml

Buffer PW

2 × 22 ml

Buffer TB

20 ml

FastPure® DNA Maxi Columns(each in a 50 ml Collection Tube)

10 个

RNase A-30 ~ -15℃保存;

内毒素清除剂可于2 - 8℃保存一个月,长期保存请置于-30 ~ -15℃;

试剂盒其他组分室温(15 ~ 25)保存。

关键词:
FastPure EndoFree Plasmid Maxi Kit
质粒大提试剂盒
未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:DNA产量低

A1:(1) 低拷贝质粒:载体因拷贝数差异会造成质粒产量明显的波动。

◇低拷贝质粒:pBR322,pACYC及其衍生载体,pSC101及其衍生载体,SuperCos,pWE15。

◇高拷贝质粒:pTZ,pUC,pBS,pGM-T。

对于低拷贝质粒应加大菌体使用量,使用200-300 ml过夜培养的菌液,同时按照比例增加Buffer P1、Buffer P2、Buffer P4的用量,洗脱缓冲液 Buffer TB应在55℃水浴锅预热,同时在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。其他步骤相同。

(2) 大质粒(>10kb):应加大菌体使用量,使用200-300 ml过夜培养的菌液,同时按照比例增加Buffer P1、Buffer P2、Buffer P4的用量,洗脱缓冲液 Buffer TB应在55℃水浴锅预热,同时在吸附和洗脱时可以适当的延长时间,以增加提取效率。其他步骤相同。

(3) 菌种问题。菌种保存过程中存在质粒丢失现象,培养细菌前最好先划线活化,以稳定产量。

(4) 细菌未充分裂解。细菌需在Buffer P1/RNase A中充分重悬,成团的细菌因无法裂解会降低产量。

(5) 试剂准备有误。Buffer P2若有沉淀析出需加热溶解。Buffer PW加入乙醇体积不准确(乙醇浓度需控制在80%)。

Q2:基因组污染。

A2:(1) 培养时间太长:菌液培养时间需控制在12-16h。

(2) 裂解问题:加入Buffer P2时,必须轻柔颠倒混匀;处理多个样品时,加入Buffer P2时算起,总时间不要超过5 min。

Q3:下游结果不理想。

A3:(1) 盐污染:确保Buffer PW洗涤两次。

(2) 乙醇污染:在最后一次Buffer PW洗涤后可将吸附柱离心时间由原来3 min增加至5 min。

(3) 膜脱落:在洗脱质粒时硅胶膜在离心过程中可能会发生脱落。建议将洗脱回的DNA溶液12,000 x g再离心1 min,小心取上清使用。

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