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  • DC201-说明书-V9.2.pdf

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    2020-06-30 11:58:00
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FastPure Plasmid Mini Kit

FastPureTM PlasmidMiniKit质粒DNA小提试剂盒简单快速:无需柱平衡,操作简单快速,30min即可完成多个样品的抽提工作。纯度高:提取的质粒可直接进行测序、酶切、PCR等实验。 产量高:每个吸附柱可吸附高达35μg的质粒DNA。使用FastPurePlasmidMiniKit分别提取大小为3.0kb、5.4kb、7.0kb、10.0kb不同大小质粒,琼脂糖凝胶电泳进行检测。结
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240.0
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货号:
DC201-01
所属分类
质粒DNA提取
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-
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组分
说明书

FastPure® Plasmid Mini Kit

质粒DNA小提试剂盒

简单快速: 无需柱平衡,操作简单快速,30 min即可完成多个样品的抽提工作。

纯度高: 提取的质粒可直接进行测序、酶切、PCR等实验。

产量高: 每个吸附柱可吸附高达35 μg的质粒DNA。

使用FastPure® Plasmid Mini Kit 分别提取大小为3.0 kb、5.4 kb、7.0 kb、10.0 kb不同大小质粒,琼脂糖凝胶电泳进行检测。结果显示本试剂盒针对不同大小的质粒均具有较好的提取效果,提取产量高。

M: 1 kb DNA Ladder (Vazyme #MD105)

将上述提取的5.4 kb、10.0 kb 质粒分别进行单酶切,琼脂糖凝胶电泳进行检测。结果显示提取的质粒纯度高,对下游酶切反应无抑制作用。

M: DL15000 DNA Marker (Vazyme #MD103)

本产品适用于提取1-5 ml过夜培养的菌液,采用优化的SDS-碱裂解法裂解细胞, 提取过程无需酚/氯仿抽提、乙醇沉淀等步骤,仅需30 min即可完成多个样品的抽提工作。本品采用独特的离心吸附柱,可高效特异的结合溶液中的质粒DNA,并最大限度的去除蛋白质、基因组、RNA和其他杂质,进而得到高质量、高纯度的质粒DNA。后续可直接用于酶切、PCR、测序、转化等生物学实验。

组分

DC201-01(100 rxn)

RNase A

150 μl

Buffer P1

30 ml

Buffer P2

30 ml

Buffer P3

40 ml

Buffer PW1

60 ml

Buffer PW2

2 × 20 ml

Elution Buffer

20 ml

FastPure® DNA Mini Columns

100 个

Collection Tubes 2 ml

100 个

 请将RNase A保存于-20℃,其他组分室温(15-25℃)保存。

关键词:
质粒DNA小提试剂盒
201
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Q1:低拷贝质粒或大质粒(>10 kb)提取

A1:若所提质粒拷贝数较低或大于10 kb的大质粒,应加大菌体使用量,使用5 ml-10 ml过夜培养的菌液,同时按照比例增加Buffer P1、Buffer P2、Buffer P3的用量,洗脱缓冲液Elution Buffer应在55℃水浴锅预热,同时在吸附和洗脱时可以适当地延长时间,以增加提取效率。

Q2:DNA产量低

A2:(1) 质粒拷贝数。载体因拷贝数差异会造成质粒产量明显的波动。高拷贝数的载体常有2-3倍的产量波动(每毫升培养过夜的菌液,高拷贝数的质粒载体产量为3-16μg)。长片段质粒和表达型载体常以中低拷贝数为主,每毫升菌液的产量约为0.5-2μg。

◇低拷贝质粒:pBR322,pACYC及其衍生载体,pSC101及其衍生载体,SuperCos,pWE15。

◇高拷贝质粒:pTZ,pUC,pBS,pGM-T。

(2) 菌种问题。菌种保存过程中存在质粒丢失现象,培养细菌前最好先划线活化,以稳定产量。

(3) 细菌未充分裂解。细菌需在Buffer P1/RNase A中充分重悬,成团的细菌因无法裂解会降低产量。

(4) 试剂准备有误。Buffer P2若有沉淀析出需加热溶解。Buffer PW2加入乙醇体积不准确(乙醇浓度需控制在80%)。

(5) 长片段质粒DNA。长片段质粒常以中低拷贝数为主,可提升菌液添加量至10 ml以提高产量。

(6) 将Elution Buffer预热至55℃,并重复二次洗脱。

Q3:用这个试剂盒能提取BAC质粒吗?最大测试过的质粒多大?

A3:没有测试过,不建议使用。最大测试过21.5 kb的质粒。

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