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    2020-06-30 00:22:11
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VAHTS AmpSeq Library Prep Kit V2

VAHTSTM AmpSeqLibraryPrepKitV2操作快速简便:从DNA到文库扩增低至5h,手工操作时间小于1.5h,中间无纯化步骤兼容多类型样本:可兼容基因组DNA、cfDNA、FFPEDNA极高的on-target比例:比例接近100%优秀的数据均一度:>95%极低的模板起始量:起始DNA模板量低至1ngOne-tube流程简单,从DNA到文库扩增低至5h,手工操作时间小于1.5h,
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说明书

VAHTS® AmpSeq Library Prep Kit V2

操作快速简便: 从DNA到文库扩增低至5 h,手工操作时间小于1.5 h,中间无纯化步骤

兼容多类型样本: 可兼容基因组DNA、cfDNA、FFPE DNA

极高的on-target比例: 比例接近100%

优秀的数据均一度: > 95%

极低的模板起始量: 起始DNA模板量低至1 ng

   One-tube

流程简单,从DNA到文库扩增低至5 h,手工操作时间小于1.5 h,中间无纯化步骤,易于实现自动化。

   兼容多类型样本

可兼容基因组DNA、cfDNA、FFPE DNA

   极高的On-target比例

On-target比例接近100%

图1. 不同样本多次重复实验的On-target比例

图1是配合VAHTS® AmpSeq Cancer HotSpot Panel (Vazyme #NA102) 建库的下机数据统计结果。由图可知,无论起始模板是来源于细胞提取的高质量基因组,还是来源于复杂模板如FFPE样本和cfDNA,On-target比例均接近100%,且多次实验重复性优秀。

图2. 不同测序深度的扩增子On-target比例

图2是本试剂盒配合VAHTS® AmpSeq Cancer HotSpot Panel (Vazyme #NA102) 建库的下机数据统计结果。由图可知,大于0.2×平均深度的扩增子On-target比例超过95%,大于0.5×平均深度的扩增子On-target比例高于90%。

•  极低的模板起始量

起始DNA模板量低至1 ng。

•  防污染

末端引物消化技术使得文库不能再作为下一轮的扩增模板使用

•  节约成本

引物序列几乎不被测序,充分利用上机数据

•  双平台兼容

兼容Illumina和Ion Torrent测序平台

•  卓越的扩增子GC兼容性

对不同GC含量扩增子均能实现均匀、有效扩增

图3. 不同样本多次重复实验的On-target比例

图3是本试剂盒配合VAHTS® AmpSeq Cancer HotSpot Panel (Vazyme #NA102)建库的下机数据统计结果。由图可知,绝大多数GC含量分布在20%-80%的扩增子测序深度均能达到或超过0.2×平均测序深度。

VAHTS® AmpSeq Library Prep Kit V2是以超多重PCR为基础,引入末端引物消化等多个核心技术,连接接头形成文库的一款扩增子建库试剂盒。本试剂盒建库全程在一管内进行,中间无纯化步骤,从扩增到生成文库,时间低至5 h,其中手动操作时间小于1.5 h。本试剂盒起始模板量为1-100 ng,兼容基因组DNA、FFPE样本、cfDNA等模板。本试剂盒适用于Illumina和Ion Torrent 两种主流高通量测序平台,并提供配套接头(Vazyme #NA110/111系列和Vazyme #NA120/121系列),可适用的Panel包括VAHTS® AmpSeq Cancer HotSpot Panel(Vazyme #NA102)、Ion Ampliseq系列Panel和AmpliSeq for Illumina系列Panel,以及相应个性化定制Panel。

相比于上一代产品(Vazyme #NA101),本试剂盒在保证扩增子文库高覆盖度和高均一度的基础上,对FFPE、cfDNA等困难样本兼容性有了极大提高,优化的多重扩增Mix减少了移液操作,建库结果更加稳定、可靠,帮助研究者和检测人员简便、快速、高质量地完成扩增子建库。试剂盒中提供的所有试剂均经过了严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

组分 NA201-01 (24 rxn) NA201-02 (96 rxn)
5 × VAHTS Multi-PCR Mix 96 μl 384 μl
VAHTS Digest Mix 2 48 μl 192 μl
VAHTSLigation Enhancer 144 μl 576 μl
VAHTSLigation Enzyme Mix 2 24 μl 96 μl
VAHTS HiFi Amplification Mix 600 μl 4 × 600 μl
PCR Primer Mix for Ion Torrent 120 μl 480 μl
PCR Primer Mix for Illumina 120 μl 480 μl
TE 1 ml 4×1 ml

-30 ~ -15℃保存。可于-20 ~ 0℃运输。

关键词:
VAHTS AmpSeq Library Prep Kit V2
NA201-01/02
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Q1:文库产量偏低

A1:(1)重新定量投入模板量,确认模板起始量是否正确。若低于下限(1 ng),需提高投入模板量;

(2)若模板质量较差,可依据说明书适当提高循环数或使用高质量模板;

(3)请确认每一步体系以及程序是否按照说明书进行,并注意每一步骤中各项操作细节;

(4)文库纯化磁珠干燥环节,不能时间过长导致磁珠过于干燥。过于干燥也会降低产量;

(5)进行文库扩增时,需确保无磁珠残留,否则可能抑制扩增反应;

(6)qPCR文库定量时,请确保循环时间以及循环数正确。

Q2:文库产量过高

A2:(1)模板投入量是否高于100 ng,若高于,可减少模板投入量;

(2)多重扩增循环数可依据说明书适当降低。

Q3:文库均一度偏低

A3:(1)较短扩增子较少:可适当提高磁珠纯化乘数(1.2 × 提高至1.5 ×)。

(2)较长扩增子较少:原因可能为模板受损严重或PCR环节扩增不充分。请使用高质量模板或将PCR环节中退火延伸时间延长。

(3)AT含量高的扩增子较少:加倍退火延伸时间或将退火温度由60℃降低至58℃。

(4)GC含量高的扩增子较少:在PCR环节的前两个循环中,将退火温度由60℃提升至62℃。

Q4:2100检测有明显的接头二聚体特征峰

A4:(1)可适当降低磁珠纯化的乘数;

(2)适当降低接头浓度。

 

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