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Discover-sc Single Cell Kit

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N601-01/02
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¥
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Discover-sc® Single Cell Kit

高灵敏度:可以从单个细胞或者极微量的基因组样本中实现全基因组扩增

高覆盖度:单细胞基因组经扩增后可达到95%以上的覆盖度

高均一度:基于无偏好性MDA的扩增,可实现全基因组的均一扩增

高保真度:Phi29 DNA聚合酶具有优于目前大多数高保真酶的保真度

高 产 量:6-8小时的反应可以产生30-40 µg的基因组DNA

操作简单:仅需3步反应,操作时间少于10分钟

设备要求低:只需水浴锅即可完成整个反应

1.扩增产品的广泛适用性

Discover-sc® Single Cell Kit扩增产物分布于2-100 kb,平均产物大小

大于20 kb,广泛适用于二代测序、大片段拷贝数变异分析、微卫星分析、

qPCR分析、基因芯片分析、Array CGH等多种下游分析。左图是Discover-sc® 单细胞试剂盒扩增产物电泳结果。

M:marker;

C:单细胞扩增产物;

D:基因组扩增产物;G:未经扩增的基因组DNA。

 

 

 

 

 

 

2.反应体系的高灵敏度!高覆盖度!高均一度!

Discover-sc® Single Cell Kit使用优化的反应体系,可以实现单细胞的全基因组扩增,在保证覆盖度与均一度的情况下,对纯化的真核生物基因组DNA的扩增灵敏度可达1 ng,细菌基因组可达10 pg。右图是Discover-sc® Single Cell Kit全基因组扩增产物均一度与覆盖度检测结果。使用分布于不同染色体的8对引物通过多重PCR检测Discover-sc® Single Cell Kit全基因组扩增产物均一度与覆盖度。扩增产物显示与未扩增基因组一致的均一度与覆盖度。

M:marker;

C:单细胞扩增产物;

D:基因组扩增产物;

G:未经扩增的基因组DNA;

NC:阴性对照。

3.极高的扩增产量

Discover-sc® Single Cell Kit单个扩增反应可以产生30-40 µg的全基因组DNA,可以进行大量的平行实验分析。下图是分别以单细胞和10 ng纯化的基因组DNA为起始模板的扩增产物累积曲线图。

4.稳定的反应体系!均匀的产物累积

Discover-sc® Single Cell Kit可以在微量样本的扩增中,实现产物均匀累积,扩增可以根据时间及产量需要在不同时间结束并拿到高覆盖度高均一度的全基因组DNA。并且在30℃下反应24小时不影响产物质量。下图是单细胞经不同时间扩增后产物基因组覆盖度与均一度检测结果。

M:Marker;

G:未经扩增的基因组DNA;

NC:阴性对照。

5.超指数的扩增原理

6.超简易的操作流程

>

Discover-sc®  Single Cell Kit是基于多重链置换扩增(MDA)的Phi29等温扩增体系。Phi29DNA聚合酶是从噬菌体中克隆的DNA聚合酶,具有很强的链置换活性,可以在体外进行不依赖于热循环的恒温DNA聚合反应,单次聚合反应可以实现长达100 kb的连续聚合延伸。Phi29 DNA聚合酶具有很强的3’-5’外切酶活性,这保证了DNA合成的高保真性,Phi29 DNA聚合酶的保真度是Taq酶的1000倍,高于目前绝大多数高保真酶的保真度。本试剂盒使用优化的Phi29 DNA聚合酶反应体系实现高灵敏度的单细胞全基因组恒温扩增。适用于从单细胞、少量组织或者微量纯化的基因组DNA进行全基因组扩增,以得到大量的高覆盖度的基因组DNA。

组分 N601-01 (24 rxn) N601-02 (96 rxn)
Discover-sc DNA Polymerase 48 μl 192 μl
Discover-sc Reaction Buffer 750 μl 3 × 1 ml
Buffer D 1 ml 2 × 1 ml
Buffer N 1 ml 2 × 1 ml
DTT, 1M 1 ml 1 ml
PBS 1 ml 2 × 1 ml
H2O 1 ml 2 × 1 ml

-20℃储存,如需更长期储存请于-70℃以下存放。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:单细胞基因组扩增时,在获得单细胞后不立即进行扩增,细胞该如何保存?

A1:可以将单细胞分离到4ul的PBS中,再将样品于-70℃或更低温保存,取出后请立即进行后续的反应。

Q2:单细胞基因组扩增阴性对照产生10-40ug DNA,为什么下游检测结果为阴性(qPCR)? 

A2:无模板的阴性对照反应中,由引物的随机聚合延伸产生的高分子量DNA产物,这种产物不影响目的产物的质量及下游分析。

Q3:单细胞基因组扩增阴性对照产生10-40ug DNA,为什么下游检测结果为阳性(qPCR)?

A3:可能存在交叉污染,由于本反应对微量DNA非常敏感,替换掉所有可能被DNA污染试试剂及用品。  

Q4:人的单细胞基因组扩增后的产物怎样检测扩增均一性?

A4:可以采用qPCR的方法检测扩增均一性。诺唯赞有相关的检测人16条常染色体扩增产物均一性的产品,详情请咨询业务员。

Q5:一些特殊的细胞,如植物细胞或者线虫卵母细胞,能否使用N601?

A5:植物单细胞含有细胞壁,需要先去除细胞壁再使用。而线虫卵母细胞细胞膜外包裹有一层壳,可直接尝试使用。如果扩增效果不好,可先将细胞膜外包裹的壳酶解掉,再进行扩增。

暂未实现,敬请期待
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货  号
N411-01/02/03