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Single Cell Full Length mRNA-Amplication Kit
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Single Cell Full Length mRNA-Amplication Kit

货  号:
N712-01/02/03
价  格:
¥
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Single Cell Full Length mRNA-Amplication Kit

模板起始量低:单个细胞或10pg Total RNA即可作为起始模板,进行高效扩增

扩增灵敏度高:使用LNA技术及精心优化的反应体系,提高低表达基因的检出量

产物完整性好:通过双端引物扩增全长cDNA,获得全转录组信息,避免了5'3'偏好性

 

单个293T细胞和10 pg Total RNA分别扩增18个循环,取1 µl纯化后的cDNA扩增产物使用Agilent 2100 Bioanalyzer进行检测,扩增产物分布于400-10000 bp,文库的peak位于2000 bp 左右;无模板阴性对照无产物。

Single Cell Full Length mRNA Amplication Kit能以1-500个细胞或10 pg-10 ng总RNA为模板,以Oligo(dT) VN Primer 为逆转录引物进行cDNA的合成,并且利用逆转录酶Sc Reverse Transcriptase的Template-switching活性在cDNA的3’端添加一段接头序列,通过该接头序列进行后续PCR扩增以获得全长cDNA扩增产物。有效避免了cDNA合成过程中的3’偏好性和rRNA的污染,对获得的全长cDNA扩增产物进行测序分析可以得到基因表达差异、可变剪接、融合基因等遗传调控信息。

Single Cell Full Length mRNA Amplication Kit ,兼容样品体积可控制为2.5 μl。一般情况下,一个反应可以产生2-20 ng的cDNA扩增产物。

  组分 N712-01 (12 rxn) N712-02 (24 rxn) N712-03 (96 rxn)
Box 1 5’ TS Oligo Primer 6 μl 12 μl 48 μl
Control Total RNA (1 μg/μl) 5 μl 5 μl 10 μl
Box 2 Lysis Buffer 230 μl 460 μl 2 × 920 μl
RNase Inhibitor 30 μl 60 μl 320 μl
Oligo (dT) VN Primer 12 μl 24 μl 96 μl
dNTP Mix 12 μl 24 μl 96 μl
DTT 6 μl 12 μl 48 μl
1st Strand Buffer 24 μl 48 μl 192 μl
Sc Reverse Transcriptase 12 μl 24 μl 96 μl
2 × Amplification Mix 150 μl 300 μl 2 × 600 μl
PCR Primer 6 μl 12 μl 48 μl
Elution Buffer 1 ml 1 ml 2 × 1 ml
Nuclease-free H2O 1 ml 1 ml 2 × 1 ml

Box 1,-70°C储存;

Box 2,-20°C储存。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:单细胞转录组扩增时,在获得单细胞后不立即进行扩增,细胞该如何保存?

A1:可以将细胞放入裂解液后于-70℃保存一段时间,但是不建议存放时间过长。

Q2: 单细胞转录组扩增出现小片段,可能原因有哪些?

A2:(1)样本出现降解,即取样前细胞已死亡,可尝试重新准备样品;

(2)样本中引入抑制组分,如:胰酶、台盼蓝、高浓度的EDTA、巯基乙醇等。可尝试将细胞在PBS中多清洗重悬几次以解除抑制,或参照3情况解决;

(3)内源性RNA酶过多,在细胞裂解过程中将RNA降解,常见于免疫细胞或一些特殊的组织中。可在加入细胞样本前,在裂解液中加入1%巯基乙醇,用RNA磁珠纯化后再继续进行后续实验。

Q3:RNA样本能否使用N712进行扩增?

A3:RNA进行扩增前,要进行质检。这是因为N711试剂盒只针对带有3’poly(A)的转录本进行扩增。如果RNA质量完整度不好,会丢失5’转录本的信息。如果RNA质量较好,可以使用N711。

Q4:DAPI染色后的活细胞能否用N712 进行转录组扩增?

A4:不同的试剂可能会对后续实验有一定影响。可通过对照实验确定DAPI试剂的影响,或将染色的活细胞在裂解后进行纯化操作。

Q5:单细胞转录组扩增,第一链cDNA合成时,是否需要热盖?

A5:需要,没有特别要求时,默认105°即可。

暂未实现,敬请期待
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货  号
N411-01/02/03