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DNA polymerase I Klenow fragment

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N104-01
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DNA Polymerase I Klenow Fragment

用于末端平滑化

用随机引物制备探针

切除3′ 突出端或补平5′ 突出端,形成平末端

 DNA 聚合酶I,大片段 (Klenow 片段)是E.coli DNA聚合酶 I 的蛋白酶水解产物,具有5´→3´ DNA 聚合酶活性和3´→5´核酸外切酶活性,但缺失了5´→3´核酸外切酶活性。Klenow片段既保留了全酶的高保真性,又不会降解 DNA 5´末端。

贮存缓冲液

25 mM Tris-HCl pH 7.4,  0.1 mM EDTA,  1 mM DTT,  50% glycerol

反应缓冲液 (10 × Blue Buffer)

100 mM Tris-HCl pH 7.9,  500 mM NaCl,  100 mM MgCl2,  10 mM DTT

来源

克隆有来自E.coli DNA Polymerase I Klenow Fragment基因的重组E. coli菌株。

单位定义

37℃、30分钟内使10 nmol的dNTP掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量,定义为1个活性单位 (U)。

组分

N104-01 5,000 U

Klenow Fragment (5 U/μl)

1 ml

10 × Blue Buffer

2 ml

反应缓冲液

10 × Blue Buffer

100 mM Tris-HCl pH 7.9 @ 25°C

500 mM NaCl

100 mM MgCl2

10 mM DTT

-20°C保存。

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Q1:N104与N101的区别?

A1:N104具有5´→3´ DNA 聚合酶活性和3´→5´核酸外切酶活性,但缺失了5´→3´核酸外切酶活性。它既具有全酶的高保真性,又不会降解 DNA 5´末端。与N101相比,N104除了能够切除片段化DNA的3′ 突出端,还能补平5′ 突出端,形成平末端结构。

 

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