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VAHTS Serum/Plasma Circulating DNA Kit

货  号:
N902-01/02
价  格:
¥
1500.00
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VAHTS®Serum/Plasma Circulating DNA Kit

适用于短片段cfDNA提取

提取纯度高,产量高,产物浓度测定准确

提取cfDNA覆盖度好,无偏好性,适于二代测序用建库实验

兼容手动提取及自动提取程序

1.适用于短片段cfDNA提取

人cfDNA为平均长度180 bp的短片段DNA,因此对较小的DNA片段回收率是评价cfDNA提取效率的关键因素。使用VATHS® 磁珠法血浆游离DNA提取试剂盒中的磁珠提取DNA ladder(70-1000 bp区间),与原始DNA以相同稀释倍数经Agilent 2100 DNA1000芯片检测如右图所示,提取后的DNA与投入DNA重合度高,基本无DNA片段大小偏好性。

2.提取纯度高

使用VAHTS®磁珠法血浆游离DNA提取试剂盒提取血浆cfDNA,经Agilent 2100高敏芯片检测,线条平滑,cfDNA峰型饱满,其它位置无杂峰,显示提取的cfDNA纯度高,杂质少。使用提取的cfDNA进行用于二代测序的建库实验,建库产量高,无杂峰,更适用于二代测序检测。

3.提取产量高

与进口柱纯化游离DNA提取kit(Q)和国产柱纯化游离DNA提取kit(T)提取同一血浆样本的游离DNA,经Qubit试剂盒(Thermo Fisher)测定浓度,VAHTS 磁珠提取产量少于Q及T柱纯化产物,但经qPCR检测血浆中掺入的痕量短片段外源DNA相对投入量的比例,VAHTS®磁珠提取的产量是Q柱纯化的1.5倍左右,T柱纯化的3倍以上,说明受Carrier RNA影响,通过Qubit测定的浓度不能反映实际cfDNA浓度,VAHTS®磁珠法提取试剂盒实际提取效率高于传统柱纯化方式。

4.提取DNA浓度精确

传统柱纯化法受到Carrier RNA加入的影响,测定浓度时比实际值偏大,影响后续操作判断。VAHTS®磁珠法提取的cfDNA浓度准确,用Qubit试剂盒定量及用KAPA gDNA绝对定量试剂盒(KAPA hgDNA Quantification and QC Kit)做QPCR的定量结果吻合度高。

5.兼容手动提取及自动提取程序

手动提取最大样本量可达16样/次,操作时间<2小时/次。由于磁珠法无需离心换管等操作,因此同样可适用于目前主流的自动核酸提取仪如KingFisher Flex Smart32游离DNA提取仪,可针对不同样品量及样品来源设定不同处理程度,简单、快速的进行大规模提取,大大降低实验者的工作量和实验中的人为误差,保证结果的稳定性和均一性。

6.cfDNA构建文库覆盖度好,无GC偏好性

使用VAHTS磁珠法血浆游离DNA提取试剂盒提取cfDNA,1ng投入建库进行测序分析。测序平台为X-Ten,cfDNA PCR文库测序数据显示GC含量正常,没有偏好性;Q30在90%以上,说明测序数据质量较好;因cfDNA属于高度片段化状态,覆盖度在60-70%,属于正常范围;dup rate普遍较高,和测序平台有关;数据显示几乎没有接头残留。

VAHTS® Serum/Plasma Circulating DNA Kit为基于超顺磁性的磁珠纯化技术,针对血清/血浆样本中短片段游离DNA富集定向优化的DNA提取试剂盒。超顺磁性氧化硅纳米磁珠具有分散度高、表面积大、吸附特异性好等特点,高效结合并富集DNA片段。

本试剂盒应用于从较灵活起始范围(200 μl~2 ml)的血清、血浆样品中提取高质量游离DNA,操作简单、快速,全程无有毒有机溶剂。针对低分子量核酸定向优化,具有DNA提取无偏好性、提取产量高、核酸纯度高、重复性强等优点。得到的DNA可直接用于定量PCR和二代测序等实验。兼容手动提取和自动提取流程,同时兼容无游离醛基的cfDNA采血管如Streck Cell-Free DNA BCT或VAHTS®游离DNA保存用采血管或普通EDTA采血管得到的血浆样本。

  组分 N902-01 (50 rxn) N902-02 (200 rxn)
Box1 VAHTSTM Particles G 2 ml 8 ml
Proteinase K 35 mg 4 × 35 mg
Protease Dissolve Buffer 2.5 ml 8 ml
Box2 Buffer SDS 6 ml 20 ml
Buffer B 45 ml 160 ml
Buffer W1 40 ml 120 ml
Buffer W2 25 ml 2 × 40 ml
Elution Buffer 10 ml 20 ml

Box1,2-8保存;溶解后的 Proteinase K须保存于-20℃

Box2,室温保存。

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Q1:使用N902提取的产物中有白色絮状沉淀是怎么回事?

A1:可能是4度保存的PK活性下降,导致蛋白去除不干净,形成白色絮状沉淀。建议不再使用,更换新的试剂。

Q2:蛋白激酶K干粉和溶解后分别怎么保存?能否将蛋白激酶k溶解后保存在4°?

A2:干粉2-8°保存,溶解后-20°保存。溶解后的酶不能保存在4℃,否则可能会有所降解;适当的解冻次数不影响,实在担心可以进行分装。

Q3:N902提取的方法是磁珠法还是柱提法?

A3:采用的是磁珠法进行提取。

暂未实现,敬请期待
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