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3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye)

科学研究试剂

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药物研发试剂

  • P115-说明书.pdf

    大小:
    2020-06-30 23:21:20
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2977

3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye)

价格:
¥
200.0
市场价
200.0
浏览量:
2977
货号:
P115-01/02
所属分类
普通PCR
数量:
-
+
库存:
19996
暂时无货
1
产品详情
FAQ
组分
说明书

3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye)

  • 醒目:含有可视化红色染料,反应后颜色醒目,适合高通量检测;

  • 方便:产品为2×即用型Mix,减少移液操作,使用方便;

  • 卓越的扩增性能:3G Taq DNA Polymerase具有更高的抑制剂耐受能力及扩增效率,提高实验成功率。

1. 可视化红色染料,更醒目方便

从不同试剂PCR产物的颜色可以看出,3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye) (Vazyme # P115) (3号)颜色更加醒目突出。

图1.不同试剂PCR产物颜色示意图

2. 卓越的扩增性能

以玉米基因组为模板,使用不同试剂盒分别扩增312bp、237bp、360bp及413bp目的片段(体系1-4),在4个检测体系中,3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye) (Vazyme # P115)扩增条带清晰单一,且无明显蛋白残留。

图2 不同试剂PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳示意图

备注:图1,图2中序号1-6分别对应产品:2 × Taq Master Mix for PAGE (Dye Plus) (Vazyme # P113)、2 × Taq Master Mix for PAGE (Dye Plus) (Vazyme # P114)、3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye) (Vazyme # P115)、Supplier T、Supplier C及Supplier G。

 

本产品包含3G Taq DNA Polymerase、dNTP、可视化红色染料以及优化的缓冲体系,使用方便,减少污染,提高了检测通量及结果的重现性。3G Taq DNA Polymerase相比于野生型Taq DNA Polymerase具有更高的抑制剂耐受能力及扩增效率。本品已加入可视化红色染料,可在反应结束后直接进行聚丙烯酰胺凝胶电泳及琼脂糖凝胶电泳,操作简便。

组分 P115-01 P115-02
2 × 3G Taq Master Mix for PAGE (Red Dye) 5ml 10 × 5ml

-30 ~ -15℃保存.

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:扩增效率低,实验组无扩增条带。

A1:(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解;引物设计是否合理,可利用BLAST检查引物特异性或重新设计引物。

(2) 模板

长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;模板GC含量过高会导致DNA的双链无法打开,此时加入PCR Enhancer(货号P021),可以有效降低解链温度;模板的GC含量过低会导致扩增效率较差,可适当延长引物长度或通过梯度PCR摸索合适的反应条件;模板中存在抑制物,特别是甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,会造成DNA脱嘌呤而影响PCR结果,建议稀释使用或重新制备;若模板为cDNA,要确认逆转录所用RNA的纯度及完整度。

(3) 扩增体系

反应体系配制错误,建议重复实验。

(4) 反应程序

检查变性温度是否准确,PCR仪指示温度与实际温度是否相符。如果温度过高,酶在前几个循环就迅速失活;温度过低则模板变性不彻底。可对退火温度设置梯度,摸索最佳的退火温度。检测延伸时间是否充足。

(5) Mg2+浓度不合适

Mg2+浓度过低可影响PCR产量甚至使PCR扩增失败;Mg2+浓度过高会降低PCR的特异性,应适当调整Mg2+浓度。

Q2:扩增的条带亮度不太亮。

A2:(1) 引物

检查人工合成的引物是否因存储条件不当而降解。

(2) 模板

首先确认模板的质量,长期放置、反复冻融会导致模板断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的DNA双链作为模板;如果模板没有了,可用首次扩增产物按倍比稀释后作为模板进行二次扩增。

 (3) 反应程序

可尝试使用Touch Down程序;延长延伸时间,提高循环数。

Q3:扩增特异性差,非特异性扩增。

A3:(1) 引物

引物设计不够优化。引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体,可降低引物浓度进行优化,必要时重新设计引物。

(2) 模板

模板不纯,被污染,需重新制备模板。

模板降解或过量,通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新纯化模板。模板的使用量请参考说明书。

(3) 反应程序

反应程序不够优化。如果出现比目的条带小的杂带,可通过提高退火温度,降低循环数调整;如果出现比目的条带大的杂带,可缩短延伸时间、降低循环数。

Q4:空白对照出现扩增产物。

A4:(1) 引物设计不合理

扩增序列与非目的扩增序列有同源性,PCR也可以扩增出非靶序列的序列。

(2) 若扩增产物条带大小与目的条带一致,说明有污染

更换新的Mix、水或引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

(3) 为了避免靶序列受到整个基因组或大片段的交叉污染,操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。

(4) 为了避免靶基因受到空气中小片段核酸污染,可用巢式PCR方法减轻或消除污染。

 

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