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Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit
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Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

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A211-01/02
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Annexin V-FITC/PI Apoptosis Detection Kit

早期凋亡检测的首选

绿色荧光标记

试剂盒中含有PI,可与Annexin V -FITC配合区分凋亡/ 坏死细胞

适用于流式细胞仪和荧光显微镜

图 A. 未经喜树碱诱导的Jurkat 细胞,用Annexin V-FITC 和碘化丙啶(PI) 双染后流式二维图(左)与直方图(右);

图 B. 用终浓度为4 μM 的喜树碱诱导Jurkat 细胞凋亡4 h,用Annexin V-FITC 和碘化丙啶(PI) 双染后流式二维图(左)以及直方图(右)。

在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸(PS) 只分布在细胞膜脂质双层的内侧,而在细胞凋亡早期,细胞膜中的磷脂酰丝氨酸(PS) 由脂膜内侧翻向外侧。Annexin V 是一种分子量为35-36 kDa 的Ca2+ 依赖性磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,因此Annexin V 被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

将Annexin V 进行绿色荧光(FITC) 标记,以标记了的Annexin V 作为探针,利用荧光显微镜或流式细胞仪可检测细胞凋亡的发生。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI) 是一种核酸染料,它不能透过正常细胞或早期凋亡细胞完整的细胞膜,但对凋亡中晚期的细胞和坏死细胞,PI 能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将  Annexin V 与PI 匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。

组分

A211-01(50 rxn)

A211-02(100 rxn)

Annexin V-FITC

250 μL

500 μL

PI Staining Solution

250 μL

500 μL

1×Binding Buffer

25 mL

2×25 mL

4-8℃保存,长期不用可将Annexin V-FITC保存在-20℃

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:组织样本上流式测定,从收样到上机之间间隔时间过久,如何处理样本?

A1:目前有有三种方法:①将组织放在PBS里面,37度保存。②将组织制备成细胞悬液,4 ℃保存。③制备贴壁细胞,培养8个小时。

这三种方法推荐第二种,制备细胞悬液然后4℃放置应该就可以,因为一般细胞运输就是这样保存的。保存液最好是培养基,会有一些保护作用,提供一定的营养。

Q2:没有早期凋亡。

A2:建议annexin和PI分开染色,提高Annexin V的染色时间,待染色结束后,不用清洗细胞,直接进行PI染色。然后建议做阳性对照,确保操作无问题,并排除由于细胞本身引起的阴性实验结果。

Q3:是否需要进行单染?

A3:需要。

Q4:试剂添加量与其他公司的试剂盒有差异,是否会影响结果?

A4:不会,不同厂家染料浓度不同,所以添加量有差异。

Q5:无法检测到凋亡。

A5:建议先用荧光显微镜观察有无细胞凋亡。实验时,建议annexin和PI分开染色,提高Annexin V的染色时间,待染色结束后,不用清洗细胞,直接进行PI染色。实验时建议添加阳性对照,判断操作是否存在问题。如果是贴壁细胞,需要将上清中的细胞也一起收集。

Q6:假阳性严重。

A6:调整胰酶消化时间,吹打细胞要轻柔,检查一下细胞本身活力。

Q7:怀疑PI染不上晚凋。

A7:100ummol H2O2处理1h,10%细胞早期凋亡;100mmmol H2O2处理1h,90%细胞晚期凋亡。若怀疑PI 存在问题,可以将正常培养的细胞,取一部分拿4%多聚甲醛进行固定,然后PI染色,铺载玻片在显微镜下观察,具体步骤可以参考TUNEL说明书中细胞固定的步骤。

Q8:是否可以做组织的凋亡?

A8:将组织消化城细胞就可以用试剂盒检测凋亡,TUNEL试剂盒也可以用流式细胞仪检测。

暂未实现,敬请期待
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