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RNA-easy Isolation Reagent

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R701-01/02
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RNA-easy Isolation Reagent

操作简便:单相提取,无需多相分层,并且全程可在室温进行操作

兼容性广:广泛适用于各类动植物和微生物样品,轻松应对各类培养细胞

RNA质量高:RNA纯度高,完整度好,产量媲美传统Trizol法提取

安全低毒:无需使用氯仿、β-巯基乙醇等有毒有害试剂

1.操作体验好

 

2.兼容范围广

RNA-easy Isolation Reagent (Vazyme #R701)广泛适用于从各类动物组织、植物组织、培养细胞和微生物等样品中提取Total RNA和Small RNA。

如上图展示,分别使用Vazyme #R701与市售Trizol产品(来自T、Ta、Ti公司),按照各自说明书对小鼠肝脏(25mg)、玉米叶(20mg)和HEK293细胞(2 × 106 个)的进行总RNA提取,并对最终获得的RNA产物(1μg)进行琼脂糖凝胶电泳检测,可以看出,Vazyme #R701 提取RNA质量高,与T公司和Ta公司的Trizol处于相同水平。

 

3.RNA产量高

针对上述获得的RNA产物使用Onedrop测定其浓度,如上图所示,Vazyme #R701针对肝脏和玉米(叶)提取RNA产量与T公司和Ta公司处于相同水平,且超过Ti公司;针对HEK293细胞, Vazyme #R701提取产量最高(与T公司相比,P 值<0.001 )。

4.RNA质量高

如上图展示,分别使用Vazyme #R701与市售Trizol产品,按照各自说明书对HEK293细胞(2 × 106 个)进行总RNA提取,并对最终获得的RNA产物使用Onedrop测定OD260/280比值, 以及Agilent 2100 Bioanalyzer进行RNA完整度分析。从图中可以看出,Vazyme #R701 提取的RNA完整度好,纯度与Th公司和Ta公司处于相同水平,超过Ti公司(P 值=0.0077)。

RNA-easy Isolation Reagent 广泛适用于从各类动物组织、植物材料、培养细胞和微生物等样品中提取Total RNA和Small RNA。与传统Trizol提取方法相比,本产品使用方法简单,不需要使用氯仿进行分层,且全程可在常温进行;此外,本产品在高效地抑制RNA酶(RNase)活性的同时,将蛋白质、DNA、多糖等杂质沉淀到管底,从而实现单相提取,并有力保证了RNA的完整度和纯度。使用本产品在50 min内即可完成全部的提取过程,提取的RNA可以直接用于cDNA克隆、qRT-PCR检测、mRNA纯化、体外翻译、Northern blotting杂交、高通量测序等各种分子生物学实验。

2~ 8℃保存。

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Q1:RNA发生降解怎么办?

A2:RNA降解可能发生在多个环节,实验过程中需要注意以下事项:

(1)确保提取RNA的试剂和器具没有被RNase污染,所有离心管、枪头及相关溶液都必须无RNase污染,耐高温器物可于150℃烘烤4 - 6 h以去除RNase,其它器物去除可用0.1%的DEPC水浸泡过夜;

(2)做好防护工作,戴口罩和一次性干净手套,并在单独的洁净区操作;

(3)细胞或组织样品需立即加入RNA-easy,并迅速进行匀浆裂解。若处理不当,发生细胞或组织冻融,RNase会被释放出来降解RNA。针对内源RNase含量高或不易匀浆的组织,需将组织切成小块后立即投入液氮冷冻,然后进行研磨,在整个研磨过程中,样品不得融化。

(4)提取的RNA样品需要妥善保存,建议取少量进行检测,其余样品分装保存-85 ~ -65℃。进行电泳检测可以提高电压并缩短跑胶时间,同时对电泳缓冲液进行冰浴降温,防止跑胶过程中RNA发生降解。

Q2:出现污染

A2:(1)蛋白质污染:采用分光光度计检测提取产物OD260/OD280偏低时,提示可能存在蛋白质污染。遇到此种情况,需要考虑是否组织投入量过大,导致裂解不充分,可以适当增加RNA-easy或者降低组织投入量进行提取。

(2)多糖污染:采用分光光度计检测提取产物OD260/OD230偏低时,提示可能存在多糖污染,需要考虑是否是因为乙醇未去除干净或者是组织投入量过大导致,此时,可以在07-2步骤8时适当对RNA沉淀进行晾干或者适当降低组织投入量进行提取操作。

(3)脂肪污染:处理脂肪含量丰富的组织时,经过07-2步骤2之后,上层是大量脂肪,可以转移澄清中间层进行下一步操作。

Q3:加入异丙醇离心后看不见沉淀?

A3:通常情况下,经过异丙醇沉淀可以看见白色胶状沉淀。若遇到沉淀不可见的情况,可能是RNA含量低或者组织投入量过低,建议加入异丙醇(07-2步骤4)后在2 ~ 8℃或-30 ~ -15℃放置10 - 30 min后再离心;且在07-2步骤5进行弃上清操作时,请采用吸取而不是倾倒的方法,以免沉淀丢失。此外,部分组织材料由于含有较多的代谢产物,导致沉淀不能聚集而分散在离心管壁上,此时,请小心弃去上清,经过75%乙醇清洗RNA沉淀之后,白色团块状沉淀会更加聚集和明显。

Q4:如何保存组织样本?

A4:如果不能立刻提取RNA,应将组织离体后迅速投入液氮冷冻,并用液氮保存;或液氮速冻后,转移至-85 ~ -65℃保存。不能直接将新鲜组织放在-85 ~ -65℃冷冻,因为样品的冻结是一个缓慢的过程,在这个过程中内源RNase会将RNA降解。此外,针对不具备液氮速冻条件的情况,可将新鲜组织充分浸泡在RNA Keeper Tissue Stabilizer (Vazyme #R501)中,在室温可存放一周,2 ~8℃存放一个月,或在-30 ~ -15℃/-85 ~ -65℃长期保存。

Q5:RNA-easy可以适用于什么组织/细胞样本?

A5:RNA-easy与传统Trizol一样属于通用型total RNA提取试剂,具有广泛的物种和组织/细胞兼容性。RNA-easy 针对常规动物组织(如:肝脏、心脏、肾脏、脑组织、骨骼肌等,不包括脾脏和肺脏)、植物组织(如水稻、玉米、拟南芥、烟草、小麦、大豆等,不包括棉花)、各类细胞系均具有极佳的提取效果。

 

暂未实现,敬请期待
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