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    2020-06-30 23:42:10
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Hyperactive pA-Tn5 Transposase for CUT&Tag

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S603-01/02
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组分
说明书

Hyperactive pA-Tn5 Transposase for CUT&Tag

操作简单:可一步实现DNA的片段化和接头连接,仅需9 h即可实现从细胞到二代测序文库的转化

超高活性:兼具Protein A&Tn5活性,DNA片段化活性极高

细胞起始量低:可兼容低至60个细胞,甚至单细胞

纯度高:蛋白纯度高、核酸残留低

应用于CUT&Tag技术

CUT&Tag( Cleavage Under Targets and Tagmentation)是替换传统的ChIP-Seq用以研究蛋白质-基因组互作的新技术,与后者相比,它具有显著优势,如:信噪比高,可重复性好,实验周期短(1天实现从细胞到文库构建),细胞投入量低等,因此,该方法适用于表观遗传学、肿瘤、干细胞等研究领域。 

CUT&Tag技术的实验流程简单,主要包括:①收集细胞;②分别孵育一抗和二抗;③孵育经过Hyperactive pA/pG-Tn5 Transposase for CUT&Tag (#S603/S602)制备的转座子;④激活转座子,进行DNA片段化; ⑤DNA提取; ⑥文库扩增与纯化。

活性检测

如图所示,对使用#S603反应体系(2 μg和10 μg体系)生成的转座子进行活性检测,针对不同的DNA投入量(50 ng和100 ng),1 μl转座子可快速(10 min)实现DNA片段化,说明该融合酶活性很高。

Hyperactive pA-Tn5 Transposase for CUT&Tag是将Protein A与经过工程学改造的超高活性Tn5转座酶进行融合,形成同时具备转座酶与Protein A活性的新型融合酶,专门适用于蛋白质-基因组互作研究的CUT&Tag技术。与传统的蛋白质-基因组互作研究方法ChIP-Seq相比,CUT&Tag具有显著优势,该技术实验周期短,信噪比高,可重复性好,且细胞投入量低,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。

组分 S603-01 (10 μg) S603-02 (20 μg)
Hyperactive pA-Tn5 Transposase ( 500ng/μl)a 20 μl 40 μl
5 × Tagment Buffer Lb 250 μl 500 μl
Coupling Buffer 250 μl 500 μl
Annealing Buffer 500 μl 1 ml

a. #S603的质量浓度是500 ng/μl,换算成摩尔浓度是7.5 pmol/μl;

b. 5 × Tagment Buffer L含Mg2+,用于测试制备的转座子片段化DNA的效果,而非CUT&Tag工作Buffer。

整个试剂盒于-85 ~ -65℃保存,干冰运输;收到货后Hyperactive pA-Tn5 Transposase于-85 ~ -65℃保存,其余组分可于-30 ~ -15℃保存;生成的转座子于-30 ~ -15℃保存,有效期一年。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:CUT&Tag除了哺乳动物细胞外,还能兼容其他的物种吗?

A1:CUT&Tag Protocol适用于动物细胞的蛋白-DNA互作研究,酵母、植物等细胞需要经过特殊的处理才能进行CUT&Tag实验,操作可以参照CUT&RUN的前端处理方式。

Q2:S602以及S603怎么选择?

A2:S602 提供的是Protein G 与Tn5的融合酶,S603提供Protein A 与Tn5的融合酶;针对大多数来源的IgG抗体,二者均具有广泛的适用性,但是Protein A对兔来源抗体的亲和力相对较高,Protein G对于小鼠等部分哺乳动物抗体的亲和力较高,请根据抗种属综合进行选择。

Q3:转座子切割之后的DNA片段提取能用柱提法代替吗?

A3:不建议用柱提法代替,因为转座子切割后的产物片段比较短,进行柱纯化的过程会导致短片段丢失。

 

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