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    2020-06-30 12:14:24
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Discover-sc Single Cell WGA Kit

价格:
¥
5000.0
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货号:
N603-01/02
数量:
-
+
库存:
19998
暂时无货
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产品详情
FAQ
组分
说明书

Discover-sc® Single Cell WGA Kit 

样本兼容性广 :适用于动植物细胞,细菌或者卵裂球,滋养外胚胎层细胞,精子等样本

高覆盖度 :单细胞基因组扩增后可达到95%以上的覆盖度

高均一度 :可用于>1 Mb的染色体拷贝数变异分析

高保真度 :Phi29 DNA聚合酶的保真度是Taq酶的1000倍

操作简单 :单管反应,操作时间少于10 min,扩增产物无需纯化

高均一度

1. 根据分布在人16条染色体上的管家基因设计引物,以人的单个293细胞全基因组扩增产物为模板进行qPCR反应。结果显示,16对qPCR引物都能正常扩增,且检测到的CT值均在22-28之间,表明Vazyme #N603试剂盒扩增均一性好。

图1.qPCR检测结果

2. 使用Vazyme #N603试剂盒对单细胞进行基因组扩增,并使用Vazyme转座酶建库试剂盒(#TD502)构建文库。最后按照有效浓度及0.01X的测序深度Pooling 后进行Illumina Miniseq测序。下机数据结果显示,reads在基因组各部位分布得比较均匀,表明Vazyme #N603扩增均一性很好,可用于大片段拷贝数变异分析。

图2.全基因组拷贝数散点分布图

高覆盖度

Discover-sc® Single Cell WGA Kit使用优化的反应体系,可以实现单细胞的全基因组扩增,且基因组覆盖度可达95%以上,与Q*及Y*公司同类型产品相比,覆盖度更高,性能更优越。

图3.N603与Q*及Y*公司同类型产品,Coverage Rate对比

超指数的扩增原理

 

图4.Phi29 DNA 聚合酶介导的 MDA 示意图

极简易的操作流程

图5.操作流程示意图

Discover-sc® Single Cell WGA Kit使用基于多重链置换扩增(MDA)的等温扩增体系,启用了定向进化改造的Phi29 DNA聚合酶,具有更高的扩增效率和扩增均一性,能够在2 h内快速实现1-1000个细胞或者微量样本的全基因组无差别扩增。单细胞基因组经N603扩增后可达到95%以上的覆盖度,扩增产物大小在2 - 100 kb之间,平均产物长度大于20 kb,广泛适用于胚胎植入前染色体检测(PGS/PGD)、肿瘤细胞、干细胞、宏基因组学等研究领域。Discover-sc® Single Cell WGA Kit中所有酶和缓冲液都经过了严格的质量控制和功能验证,优化的实验体系最大程度上提升了扩增均一性,保证了稳定性和重复性。

组分 N603-01 (24 rxn) N603-02 (96 rxn)
Discover-sc WGA Enzyme Mix 48 μl 192 μl
Discover-sc WGA Master Buffer 750 μl 3 ×1 ml
Buffer D 1 ml 2 ×1 ml
Stop Solution 1 ml 2 ×1 ml
DTT, 1M 1 ml 1 ml
Cell Storage Buffer 1 ml 2 ×1 ml
H2O 1 ml 2 ×1 ml

-30 ~ -15℃保存,如需更长期储存请于-70℃以下存放。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:没有扩增产物: 

A1:① 样品在收集过程中丢失: 重新收集样品,确定不会因操作不当,造成样品意外丢失。 

② 基因组DNA样本中含有抑制反应的成分: 纯化或者稀释DNA样品。如果样品纯化过程中有乙醇沉淀或漂洗步骤,样品中残留的酒精会抑制反应,纯化过程中要让酒精充分挥发。 

③反应温度过高: 反应温度应控制在30℃,过高的温度会使聚合酶失活,如果使用具有热盖功能的PCR仪 进行反应,请将热盖温度设为70℃。 

Q2:扩增产生7.5 - 20 μg DNA,但检测到部分染色体错位或等位基因丢失: 

A2:①对于以基因组DNA为起始模板的反应: 基因组DNA存在降解。应使用完整的DNA或使用更多量的DNA做为模板。 

②对于以细胞作为起始的反应:细胞存在凋亡或者细胞被固定过导致DNA降解;细胞存在难以被裂解的细胞壁(如植物细胞)不适合直接作为起始材料。 

Q3:阴性对照有一定的产出,但下游检测结果为阴性(如qPCR): 

A3:无模板的阴性对照反应中,由引物的随机聚合延伸产生的高分子量DNA产物,这种产物不影响目的产物的质量及下游分析。 

Q4:阴性对照扩增产生7.5 - 20 μg DNA,且下游检测结果为阳性(如qPCR): 

A4:可能存在交叉污染,由于本反应对微量DNA非常敏感,替换掉所有可能被DNA污染的试剂及用品。

 

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