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Hyperactive pA-MNase for CUT&RUN

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说明书

Hyperactive pA-MNase for CUT&RUN

操作简单:利用酶切代替超声破碎,仅需1天即可实现从细胞到二代测序文库的转化

超高活性:DNA片段化活性极高

细胞起始量低:可兼容低至50个细胞

纯度高:蛋白纯度高、核酸残留低

应用于CUT&RUN技术

CUT&RUN(cleavage under targets and release using nuclease)是替换传统的ChIP-Seq用以研究蛋白质-基因组互作的新技术,与后者相比,它具有显著优势,如:信噪比高,可重复性好,实验周期短(1天实现从细胞到文库构建),细胞投入量低等,因此,该方法适用于表观遗传学、肿瘤、干细胞等研究领域。 

CUT&RUN技术的实验流程简单,主要包括:

1.收集细胞并将细胞与连有伴刀豆蛋白A的磁珠进行结合;

2. 孵育一抗;

3. 孵育Protein A/G MNase;

4. 激活Protein A/G MNase进行片段化;

5.DNA提取;

6.文库构建。

活性检测

如图所示,针对300 ng质粒DNA,加入不同质量的pA-MNase于37℃进行酶切反应10 min。只需要0.5 ng pA-MNase即可实现300 ng质粒DNA片段化,说明该融合酶活性很高。

Hyperactive pA-MNase for CUT&RUN是将Protein A与经过工程学改造的超高活性MNase进行融合,形成同时具备MNase外切酶活性与Protein A活性的新型融合酶,专门适用于蛋白质-基因组互作研究的CUT&RUN技术。与传统的蛋白质-基因组互作研究方法ChIP-Seq相比,CUT&RUN具有显著优势,该技术实验周期短,信噪比高,可重复性好,且细胞投入量低,尤其适用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。

组分

S701-01

S701-02

Hyperactive pA-MNase (500ng/μl)

20 μl

40 μl

于-30 ~ -15℃保存,-20 ~ 0℃运输。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:CUT&RUN除了哺乳动物细胞外,还能兼容其他的物种吗?

A1:CUT&RUN Protocol适用于动物细胞的蛋白-DNA互作研究,酵母、植物等细胞需要经过特殊的处理才能进行CUT&RUN实验,具体操作可以参考已经发表的文献。

Q2:pA-MNase切割后的DNA片段提取方式有要求吗?

A2:pA-MNase切割后的DNA,可以选择柱提法或者沉淀法。

 

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