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VAHTS Universal V6 RNA-seq Library Prep Kit for MGI
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VAHTS Universal V6 RNA-seq Library Prep Kit for MGI

货  号:
NRM604-01/02
价  格:
¥
11800.00
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VAHTS® Universal V6 RNA-seq Library Prep Kit for MGI

快速:极简的操作流程,使建库时间缩短了 2 h

兼容:兼容多种 RNA 富集模块,随心搭配

通用:灵活自由的选择链特异或非链特异文库

VAHTS® Universal V6 RNA-seq Library Prep Kit for MGI是针对MGI高通量测序平台定向开发的转录组文库构建专用试剂盒。试剂盒包含两种类型的cDNA二链合成Buffer,可根据需要选择进行普通转录组或链特异转录组建库。试剂盒将二链合成、末端修复和dA-Tailing合并为一步,中间不需要纯化步骤,极大的简化了操作流程,缩短了建库时间。优化的反应体系,提高了文库转化效率,能兼容更低起始投入量,对不同起始量的RNA都有均一的覆盖度。本试剂盒利用磁珠分选的方式,可以快速获得特定长度的文库,能够满足不同实验的个性化需求。试剂盒包含的所有酶和缓冲液都经过了严格的质量控制和功能验证,最大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

组分

NRM604-01 (24 rxn)

NRM604-02 (96 rxn)

Frag/Prime Buffer

468 μl

2 × 936 μl

Actinomycin D (5mg/ml)

24 μl

96 μl

1st Strand Buffer 2

144 μl

576 μl

1st Strand Enzyme Mix 2

48 μl

192 μl

2nd Strand Buffer 2 (with dNTP)

600 μl

4 × 600 μl

2nd Strand Buffer 2 (with dUTP)

600 μl

4 × 600 μl

2nd Strand Enzyme Super Mix

360 μl

2 × 720 μl

Rapid Ligation Buffer 3

600 μl

4 × 600 μl

Rapid DNA Ligase 2

120 μl

480 μl

PCR Primer Mix 3

120 μl

480 μl

VAHTS HiFi Amplification Mix

600 μl

4 × 600 μl

Heat-labile UDG

24 μl

96 μl

-30 ~ -15℃保存。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1: RNA样品质控

A1:为保证建库质量,在实验开始前必须对RNA样品进行质控,RNA样品总量、纯度须满足以下条件:

a).总RNA模板的起始投入量应≥ 50 ng ,若起始投入量过低,不能确保得到足够的mRNA用于后

续文库构建。

b).OD260/OD280比值应介于1.8 - 2.1之间,若比值> 2.1则RNA样品中可能有基因组污染,若比值< 1.8则可能有蛋白质污染;OD230/OD260比值应介于0.4 - 0.5之间,若比值> 0.5则可能RNA样品中有盐或小分子杂质污染,比值< 0.4可能有基因组污染。

Q2: RNA样品准备

A2:a).混匀含RNA样品的溶液时应小心操作,轻柔吹打,切勿涡旋振荡,否则会使RNA断裂,影响

文库片段大小;

b).经Poly(A)法富集的mRNA或去除rRNA后的RNA应尽快进行后续操作,避免RNA降解。

c).如果RNA的初始浓度较低时,可使用冻干、乙醇沉淀、过柱回收或VAHTS® RNA Clean Beads 

(Vazyme #N412)磁珠纯化等方法浓缩RNA。

Q3: DNA纯化磁珠的注意事项

A3:a). 磁珠从2 ~ 8℃取出后应平衡至室温,否则影响磁珠的抓取效率。

b).每次吸取磁珠前都应将其涡旋振荡充分混匀。

c).样品与磁珠充分混匀后置于磁力架上进行分离时,待溶液彻底澄清后再吸取上清,吸取上清时应余留2 - 3 μl。若不慎吸到磁珠,会造成得率下降、分选效果不佳等问题,甚至影响后续酶反应,此时可将磁珠混匀重新置于磁力架上再次分离即可。由于磁力架吸力不同等原因,默认分离时间有时可能需要延长,以彻底分离磁珠和液体。

d).使用新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠,久置的80%乙醇会导致杂质残留以及文库产出降低。漂洗过程中EP管应始终置于磁力架中,请勿扰动磁珠。

e).第二遍80%乙醇漂洗磁珠操作,应尽量吸干上清,减少杂质残留。

f).产物洗脱前应将磁珠置于室温干燥。干燥不充分容易造成无水乙醇残留影响后续反应;过分干燥又会导致磁珠开裂进而降低纯化得率。通常情况下,室温干燥5 - 10 min足以让磁珠充分干燥,请勿加热干燥(如置于37℃烘箱干燥)。

Q4.其他注意事项

A4:a). 使用前请将试剂盒各组分置于冰上解冻。解冻后上下颠倒数次充分混匀,短暂离心后

置于冰上待用。

b).建议使用带滤芯的吸头,在吸取不同样品时更换吸头。

c).在二链合成前使用的耗材必须为RNase-free,二链合成及之后为DNase-free。

d).实验过程中务必使用新鲜的Nuclease-free H2O,建议分装至小管中逐个取用,用后弃去。

e).务必佩戴手套操作,接触RNase-free空间外设备或其他工作区间后,请更换手套。

f).所有的试剂使用后务必立即盖上盖子,避免污染。

g).推荐在带热盖的PCR仪中进行各步骤反应,使用前应预热PCR仪至反应温度附近。

h).PCR产物因操作不当极容易产生气溶胶污染,进而影响实验结果准确性。因此,我们推荐将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化检测区进行强制性的物理隔离;使用专用的移液器等设备;并定时对各实验区域进行清洁,以保证实验环境的洁净度。

i).实验过程中如需暂停,请严格按照使用方法中注明的可停放点将样品放置于合适的温度下保存,不正确存放可能会降低建库成功率。

 

暂未实现,敬请期待
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