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Hyperactive pG-MNase for CUT&RUN
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Hyperactive pG-MNase for CUT&RUN

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S702-01/02
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Hyperactive pG-MNase for CUT&RUN

操作简单:利用酶切代替超声破碎,仅需1天即可实现从细胞到二代测序文库的转化

超高活性:DNA片段化活性极高

细胞起始量低:可兼容低至50个细胞

纯度高:蛋白纯度高、核酸残留低

应用于CUT&RUN技术

CUT&RUN(cleavage under targets and release using nuclease)是替换传统的ChIP-Seq用以研究蛋白质-基因组互作的新技术,与后者相比,它具有显著优势,如:信噪比高,可重复性好,实验周期短(1天实现从细胞到文库构建),细胞投入量低等,因此,该方法适用于表观遗传学、肿瘤、干细胞等研究领域。

CUT&RUN技术的实验流程简单,主要包括:

1.收集细胞并将细胞与连有伴刀豆蛋白A的磁珠进行结合;

2.孵育一抗;

3.孵育pA/pG-MNase;

4.激活pA/pG-MNase进行片段化;

5.DNA提取;

6.文库构建。

活性检测

如图所示,针对300 ng人源基因组DNA,梯度加入不同量的S701或S702,于37℃进行酶切反应10 min。只需要0.1U 新型融合核酸酶即可实现300 ng人源基因组DNA片段化,表明该融合酶活性很高。

Hyperactive pG-MNase for CUT&RUN是将Protein G与微球菌核酸酶(Micrococcal nuclease,MNase)进行融合,形成同时具备Protein G与MNase双重活性的新型融合酶,专门适用于蛋白质-基因组互作研究的CUT&RUN技术。CUT&RUN技术极大简化了传统ChIP-seq的操作流程,仅需1 - 1.5天即可实现从细胞到二代测序文库构建,且细胞投入量低,信噪比高,可重复性好,广泛应用于早期胚胎发育、干细胞、肿瘤以及表观遗传学等研究领域。

组分

S702-01(200 U)

S702-02(400 U)

Hyperactive pG-MNase (10U/μl)

20 μl

40 μl

MNase Dilution Buffer

200 μl

400 μl

于-30 ~ -15℃保存。运输条件:≤ 0℃。

 

 

 

 

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1: S701与S702如何选择?

A1:S701试剂盒提供的是Protein A与MNase融合的核酸酶,S702提供的是Protein G与MNase融合的核酸酶,可以直接用于CUT&RUN实验,具体用量请参考文献相关操作方案【Skene PJ, et al. (2018) Nat. Protoc 13(5), 1006-1019.】 ;针对大多数抗体,二者均具有广泛的适用性,但是Protein A对兔来源抗体的亲和力相对较高,Protein G对于小鼠等部分哺乳动物抗体的亲和力较高,请根据抗体来源种属与Protein A或者Protein G的亲和能力进行选择。

Q2: CUT&RUN适用于什么物种?

A2:CUT&RUN Protocol广泛适用于常规哺乳动物细胞的蛋白-DNA互作研究,酵母、植物等细胞均有文献报道或相关研究。

 

暂未实现,敬请期待
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