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    2021-01-04 10:32:15
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Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

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货号:
Q712-02/03
数量:
-
+
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1997
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FAQ
组分
说明书

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix

高产量、全平台通用的qPCR专用预混液

超高的扩增平台值:扩增产量大幅度提升,拥有超高扩增平台值

灵敏度与特异性完美平衡:采用的Taq Pro DNA Polymerase是经过升级改造的、基于抗体法修饰的新一代热启动聚合酶,配以针对 qPCR 优化的最适Buffer以及专利特异性促进因子,有效避免引物二聚体和非特异性扩增的产生

广泛的平台适用性:特殊的ROX参比染料,适用于所有qPCR仪,无需在不同的仪器上调整ROX浓度

超高的扩增平台值

图1

以 Hela cDNA 为模板,使用 Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix(Vazyme #Q712) 预混液以及市售其他品牌染料法qPCR 试剂(来自Supplier B、TA、R、TB),在同样反应条件下扩增 6 个不同的基因。结果显示,在不同扩增体系上,与同类产品相比,Vazyme #Q712 预混液灵敏度高,扩增产物产量高,拥有超高的平台值。

灵敏度与特异性完美平衡

图2

图 A 是将 pUC19 质粒进行 8 个 10 倍梯度稀释,图 B 是根据图 A 的 CT 值得出的标准曲线。第 8 个梯度中质粒拷贝数浓度约为 6 copies/4 μl,使用 Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix(Vazyme #Q712) 预混液对各稀释梯度中的 pUC19 进行检测,每孔模板使用量为4 μl。结果显示,Vazyme #Q712 预混液在宽广的模板量区间内具有优秀的线性关系,可以检测出个位数拷贝的待测模板,灵敏度极高。

图 C 是以HeLa 细胞cDNA为模板,使用Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix(Vazyme #Q712) 预混液以及市售其他品牌染料法 qPCR 试剂(分别来自 Supplier B、TA、R、TB),在相同条件下测试24个体系,检测扩增特异性。统计结果显示:Vazyme #Q712预混液能够检测超过92%(22/24) 的目标基因,特异性最佳。

全平台通用

图3

使用 Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix(Vazyme #Q712) 在不同类型的 qPCR 仪(机 型:ABI Stepone、ABI QuantStudio 3、Roche LightCycler 480)上扩增基因,定量结果优秀。说明Vazyme #Q712预混液仪器适用性广,无需针对不同仪器调整ROX浓度。

Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix为SYBR GreenⅠ嵌合荧光法进行 qPCR 反应的专用预混液。本产品采用的Taq Pro DNA Polymerase是经过升级改造的、基于抗体法修饰的新一代热启动聚合酶,具有特异性强、检测灵敏度高、扩增产量高等诸多优点。配以针对qPCR优化的最适Buffer以及专利特异性促进因子,极大地提高了qPCR扩增产量,拥有超高平台值,适用于进行高特异性、高灵敏度的qPCR扩增。Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix含有特殊的ROX Reference Dye,适用于所有qPCR仪器,无需在不同的qPCR仪器上调整 ROX 的浓度。

组 分

Q712-02 (500 rxns/20 μl reaction)

Q712-03 (2,500 rxns/20 μl reaction)
2 × Taq Pro Universal SYBR qPCR Master Mix 4 × 1.25 ml 5 × Q712-02

-30 ~ -15℃避光保存,Master Mix解冻后可于2 ~ 8℃避光条件下稳定存放6个月;≤ 0℃运输。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:扩增曲线形状异常

A1:① 扩增曲线不光滑:信号太弱,经系统矫正后产生。提高模板浓度重复实验。

② 扩增曲线断裂或下滑:模板浓度较高,基线的终点值大于CT值。减小基线终点(CT值-4),重新分析数据。

③ 个别扩增曲线突然骤降:反应管内留有气泡。处理样本时要注意离心,进行扩增反应之前要仔细检查反应管内是否有气泡残留。

Q2:反应结束无扩增曲线出现

A2:① 反应循环数不够:一般设置循环数为40,但需要注意的是过多的循环会增加过多的背景信号,降低数据可信度。

② 确认程序中是否设置了信号采集步骤:两步法扩增程序一般将信号采集设置在退火延伸阶段;三步法扩增程序应当将信号采集设置在72℃延伸阶段。

③ 确认引物是否降解:长时间未用的引物应先通过PAGE电泳检测完整性,以排除其降解的可能。

④ 模板浓度过低:减少稀释度重复实验,一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。

⑤ 模板降解:重新制备模板,重复实验。

Q3:CT值较大

A3:①扩增效率极低:优化反应条件,尝试三步法扩增程序,或者重新设计合成引物。

②模板浓度过低:减少稀释度重复实验,一般未知浓度的样品先从最高浓度做起。

③模板降解:重新制备模板,重复实验。

④PCR产物过长:推荐PCR产物长度为80 - 150 bp。

⑤体系中存在PCR抑制剂:一般为模板带入,加大模板稀释倍数或者重新制备模板重复实验。

Q4:阴性对照出现明显扩增

A4:①反应体系污染:更换新的Master Mix、水、引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染。

②引物二聚体的出现:配合融解曲线进行分析。

Q5:绝对定量时标准曲线线性关系不佳

A5:①加样误差:提高模板稀释倍数,提高加样体积。

②标准品降解:重新制备标准品,重复实验。

③模板浓度过高:提高模板稀释倍数。

Q6:融解曲线出现多峰

A6:①引物设计不优:根据设计原则设计合成新的引物。

②引物浓度过高:适当降低引物浓度。

③cDNA模板带有基因组污染:重新制备cDNA模板。

Q7:实验重复性差

A7:①加样体积失准:使用性能较好的移液枪;将模板做高倍稀释,以大体积加入反应体系中。

②定量PCR仪不同位置温度控制不一致:定期校准仪器。

③模板浓度过低:模板浓度越低,重复性越差,减少模板稀释度或提高加样体积。

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