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One Step Mouse Genotyping Kit
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One Step Mouse Genotyping Kit

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PD101-01
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¥
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One Step Mouse Genotyping Kit

动物组织直接进行 PCR 反应的试剂盒

基于蛋白酶 K 的特制裂解液。

裂解产物直接用于PCR扩增,无需提取基因组。

广泛适用于2 kb以内目标片段扩增,并适用于4对引物以内的多重PCR 反应。

使用 One Step Mouse Genotyping Kit 以同一个粗提样品为模板,扩增17个不同的基因 (长度为 200 bp-800bp 之间)。所有片段均可以实现特异性高产量扩增。

M: DL2,000 Plus DNA Marker

本试剂盒包含整套的DNA粗提取以及PCR扩增体系,适用于小鼠基因型快速鉴定 (Rapid Genotyping)。可用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中快速释放基因组DNA,产物可直接进行PCR扩增,无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作,极大缩短了实验耗时。试剂盒中配有2 × Taq Plus Master Mix (Dye Plus),包含高性能的 Taq Plus DNA Polymerase,dNTP以及优化的缓冲体系,PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增,减少了开管/移液等操作,显著降低了样品交叉污染并且提高了检测通量和结果的重现性。独特的保护剂使得TaqPlus Master Mix经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。体系中预混有电泳缓冲液和染料,可在反应结束后直接进行电泳,使用方便快捷。

组 分

PD101-01

1 × Mouse tissue Lysis Buffer

40 ml

Proteinase K

800 μl

2 × Taq Plus Master Mix (Dye Plus)

5 ml

25 mM MgCl2

500 μl

5 × PCR Enhancer

2 ml

1 × Mouse tissue Lysis Buffer 4℃保存;其余组分-20℃保存。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:PD101试剂盒中Proteinase K的储存以及裂解的注意事项。

A1:Proteinase K存储条件为 -20℃。若经常使用,可将Proteinase K分管保存在-20度,防止反复冻融。裂解时可以将Proteinase K与Lysis Buffer混匀后放在常温下即可,再取小鼠组织,其他可参照说明书。

Q2:PD101试剂盒中的2 × Taq Plus Master Mix 中是否有Mg2+?另外的MgCl2如何用?

A2:2 × Taq Plus Master Mix 中有Mg2+,浓度为1.5 mM。关于MgCl2的使用,可在扩增效率不佳的时候,用来调节反应条件,每次可增加0.5mM。

Q3:PD101试剂盒能否做其他物种?

A3:确定可以做大鼠和小鼠,像其他昆虫,哺乳动物也可以,但不能保证,只能试一试。也可尝试用我们公司产品 P505,这款酶的直扩能力超强。

Q4:使用PD101,裂解孵育之后小鼠尾巴形态没变,和最开始一样。

A4:这是正常的现象。加入裂解液孵育之后已经有部分基因组DNA释放出来了,小鼠尾巴的形态改变不大。

Q5:PD101裂解组织后的裂解液可以用NanoDrop测DNA浓度吗?

A5:不可以,因为裂解组织后的裂解液中的东西比较复杂,有buffer、蛋白酶K,而且DNA的浓度低,用NanoDrop测量容易虚高。

Q6:使用PD101,在一个反应体系中加入两对引物,扩增效果差。

A6:可能两对引物会互相干扰,建议单独扩增。若一定要在同一个体系中进行,建议调整两对引物使用的比例,如果重新设计引物,在保证引物特异性的前提下,使四条引物的Tm值尽量接近,差值不要太大(2-3℃);如果不重新设计引物,也可以适当调整退火温度,同时,适当延长退火时间(30s-1 min)。

Q7:扩增产量低或者无法扩增。

A7:(1) 组织中的一些PCR抑制物混入裂解液中:可尝试将裂解产物稀释10倍后再进行PCR扩增;

(2) DNA释放效率较差:可尝试延长55℃孵育时间至3 h;

(3) Proteinase K没有充分灭活:灭活步骤在沸水浴中进行;

(4) PCR循环数不够:一般而言,30~35个循环已经足以扩增足量的产物。然而对于某些片段,提高循环数可以获得更好的扩增效果;

(5) 扩增反应退火温度设置太高:降低退火温度(每次降低3℃);

(6) PCR引物错误:设置以纯化过的小鼠基因组为模板的阳性对照反应。

Q8:非特异性产物很多。

A8:(1) PCR反应体系在室温下配制:在冰水浴中配制反应体系可显著降低非特异性扩增;

(2) 扩增反应退火温度设置太低:提高退火温度(每次提高2℃);

(3) PCR引物错配严重:重新设计引物。

Q9:阴性对照也出现扩增。

A9:PCR反应体系出现污染:逐个更换组织裂解体系、PCR扩增体系中的每一个组分。

暂未实现,敬请期待
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货  号
G102
货  号
G103