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Jurkat-FcγRIIIa-F158 Effector Cells

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Jurkat-FcγRIIIa-F158 Effector Cells 

ADCC Bioassays, F variant

操作简单

重复性好

Fc Effector Activity Bioassay 

 

 

                                         


 图1A  图1B

以Rituximab为检测抗体,Raji细胞为靶细胞,建立可以反映Rituximab 作用机制的Jurkat-FcγRIIIa-F158 Effector Cells,检测原理和结果分别由图1A、1B展示。

重复性、线性、精密性和准确性

         
图2A

图2B 

表1

根据ICH指南,以Rituximab为检测抗体,Raji为靶细胞,对 ADCC F variant Bioassay进行重复性(图2A)、线性(图2B)、精密性和准确性(表1)进行验证。

抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用(ADCC)是一种免疫防御机制。
典型的ADCC通过抗体激活自然杀伤(NK)细胞。 NK细胞在其细胞表面表达Fc受体,主要是CD16或FcγRIIIa(CD16a)。这些Fc受体识别并结合已结合至病原体感染的靶细胞表面的抗体如IgG的Fc部分。一旦Fc受体与IgG的Fc区结合,自然杀伤细胞就会释放出攻击病原体感染靶细胞的细胞因子,例如IFN-γ和细胞毒性分子。
人FcγRIIIa 近膜Ig样区核苷酸位点559处发生鸟嘌呤(G)到胸腺嘧啶(T)的点突变后,由其转录合成的受体蛋白内第158位的缬氨酸(V)被苯丙氨酸(F)取代,FcγRIIIa由此呈现出二态性。FcγRIIIa- F158较FcγRIIIa- V158 与人 IgG 结合的亲和力低,临床研究表明,FcγRIIIa基因多态性与肿瘤病人的预后有关。

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Jurkat-FcγRIIIa-F158 Effector Cells

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长期保存:液氮或-140℃冰箱。

运输条件:干冰。

 
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Q1:Assay性能有波动

A1:如果靶细胞没有在一致的可控的条件下生长,那么assay测定的结果会有所不同。根据细胞培养指南,保证细胞的接种密度和培养体积是一致且准确的。同时,检测细胞倍增的时间。

Q2:较低的发光检测值(RLU读数)

A2:a)选择用于检测板发光的仪器。不建议使用主要设计用于荧光检测的一起仪器。光度计测量和报告的发光值是相对值,实际的RLU值会因检测仪器不同而变化。

b)每孔细胞数量不足会导致RLU变低。根据说明书处理细胞和进行铺板,保证每个孔中有足够数量的活细胞。

c)Bio-Lite试剂活性降低会导致RLU变低。按照说明书存储和使用Bio-Lite试剂。

Q3.较低的assay窗口(fold induction)

A3:a)优化测试样品的浓度范围,保证获得完整的剂量—效应曲线,包括完整的上下平台渐近线。

b)在3-24h范围内优化assay的孵育时间。
如果未经处理的对照的RLU值小于板中空白孔RLU值的10倍以上,则在计算窗口时,要使用减去空白孔背景值的对照RLU值。

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Jurkat-FcγRIIIa-F158 Effector Cells

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