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Jurkat-FcγRIIa-H131 Effector Cells

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说明书

Jurkat-FcγRIIa-H131 Effector Cells 

ADCP Bioassays, H variant

操作简单

重复性好

Fc Effector Activity Bioassay 

 

 

                                         


 图1A  图1B

以Rituximab为检测抗体,Raji细胞为靶细胞,建立可以反映Rituximab 作用机制的Jurkat-FcγRIIa-H131 Effector Cells,检测原理和结果分别由图1A、1B展示。

重复性、线性、精密性和准确性

         
图2A

图2B 

表1

根据ICH指南,以Rituximab为检测抗体,Raji为靶细胞,对 ADCP H variant Bioassay进行重复性(图2A)、线性(图2B)、精密性和准确性(表1)进行验证。

抗体依赖性细胞介导的细胞吞噬作用(ADCP)是一种免疫防御机制,是抗体药物开发过程中重要的作用机制之一。
单核细胞、巨噬细胞、嗜中性粒细胞和树突状细胞上表达的FcγRIIa (CD32a), FcγRI (CD64), FcγRIIIa (CD16a) 均可介导ADCP,但FcγRIIa (CD32a)是参与ADCP最主要的FcγR受体。这些Fc受体识别并结合已结合至病原体感染的靶细胞表面的抗体如IgG的Fc部分。一旦Fc受体与IgG的Fc区结合,相应的髓样效应细胞就会发挥ADCP功能。
FcγRIIa因其第二个Ig样配体结合结构域中131位的精氨酸会被组氨酸取代(R131H)而呈现多态性,相比于FcγRIIa-R131,FcγRIIa-H131对于人IgG2的亲和力更强。临床研究表明FcγRIIa多态性(H131R)与IgG1亚类单克隆抗体(mAbs)如利妥昔单抗的反应性具有关联性。

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Jurkat-FcγRIIa-H131 Effector Cells

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长期保存:液氮或-140℃冰箱。

运输条件:干冰。

 
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Q1:Assay性能有波动

A1:如果靶细胞没有在一致的可控的条件下生长,那么assay测定的结果会有所不同。根据细胞培养指南,保证细胞的接种密度和培养体积是一致且准确的。同时,检测细胞倍增的时间。

Q2:较低的发光检测值(RLU读数)

A2:a)选择用于检测板发光的仪器。不建议使用主要设计用于荧光检测的一起仪器。光度计测量和报告的发光值是相对值,实际的RLU值会因检测仪器不同而变化。

b)每孔细胞数量不足会导致RLU变低。根据说明书处理细胞和进行铺板,保证每个孔中有足够数量的活细胞。

c)Bio-Lite试剂活性降低会导致RLU变低。按照说明书存储和使用Bio-Lite试剂。

Q3.较低的assay窗口(fold induction)

A3:a)优化测试样品的浓度范围,保证获得完整的剂量—效应曲线,包括完整的上下平台渐近线。

b)在3-24h范围内优化assay的孵育时间。

c)如果未经处理的对照的RLU值小于板中空白孔RLU值的10倍以上,则在计算窗口时,要使用减去空白孔背景值的对照RLU值。

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Jurkat-FcγRIIa-H131 Effector Cells

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