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Blood Direct PCR Kit V2

货  号:
PD103-01/02
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¥
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Blood Direct PCR Kit V2

升级版全血直扩PCR 试剂盒

基于改造的Phanta® Blood Super-Fidelity DNA Polymerase,具有极强的扩增效率和PCR 抑制物耐受度

适用各种血液样本,兼容常规抗凝剂

可耐受高达40% 的全血模板

可从全血中高效扩增长达7.5 kb 的基因组片段

1.广泛的物种兼容性

分别从人、大鼠、小鼠、猪、狗、兔、鸡、鸟、牛的-20℃存储的肝素抗凝全血中扩增237 bp的DNA片段。所有血样的血液模板使用浓度为10%。其中NTC:No Template Control;PC:Positive Control,使用纯化过的人基因组DNA 作为扩增模板。PCR 反应结束后进行PCR 电泳检测。以质粒为模板,primer pair 1和primer pair 2为引物,分别扩增两段大小均为690 bp,GC含量均为72%的片段。结果显示,只有加入PCR Enhancer的实验组才能扩增出如图所示的目的片段。

2.优秀的扩增性能

以人-20℃存储的肝素抗凝血为模板,扩增不同长度DNA片段。PCR结束后电泳显示,Blood Direct PCR Kit V2可以高效扩增长达7.5 kb的片段。

Blood direct PCR Kit V2可以直接对全血样本进行PCR,无需进行DNA 纯化或样品预处理。可用于直接扩增的血样类型包括:新鲜血液、4℃贮存血液、冷冻血液以及储存在Whatman 903® 和FTA® 商用卡上的干血渍,且兼容所有常规抗凝剂(EDTA、柠檬酸盐、肝素等)。试剂盒中包含Phanta® Blood Super-Fidelity DNA Polymerase,该酶对全血样品中的PCR 抑制剂具有超强的抵抗力,可扩增全血浓度高达40%。配以精心优化的2 × Phanta® Blood Buffer,Blood Direct PCR Kit 能够从全血样品中高效扩增长达7.5 kb的基因组片段。试剂盒配有与哺乳动物和其他许多脊椎动物兼容的引物预混液Positive control primer mix,可用于进行阳性对照反应。

组 分

PD103-01

PD103-02

Phanta Blood Super-Fidelity DNA Polymerase (1 U/μl)

75 μl

300μl

2 × Phanta Blood Buffer V2

1.25 ml

1.25 ml × 4

Positive control primer mix (10 μM each)

50 μl

50 μl

10 mM each dNTPs

50 μl

200 μl

10 × Loading buffer

1.25 ml

1.25 ml

-20℃保存

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:无扩增产物或者产物量很少。

A1:(1) 核对引物设计,确认引物的纯度和浓度。

(2) 重复实验,确认反应体系配制、反应程序设置无误。

(3) 增加循环数。

(4) 提高Mg2+ 浓度。

(5) 优化退火温度。

(6) 尝试不同的血液用量。

Q2:产物呈现高分子量弥散条带。

A2:(1) 扩增样品电泳检测前离心取上清。

(2) 延伸时间不应超过60 sec/kb。

(3) 优化退火温度。

(4) 尝试不同的血液用量。

(5) 减少总循环数。

(6) 降低引物浓度。

Q3: 产物呈现低分子量分散带。

A3:(1) 扩增样品电泳检测前离心取上清;

(2) 提高退火温度;

(3) 尝试不同的血液用量;

(4) 降低引物浓度;

(5) 减少总循环数;

(6) 重新设计引物。

Q4: 全血扩增引物设计注意事项。

A4:(1) 引物3’端最后一个碱基选择C或G。

(2) 引物3’端最后8个碱基应避免出现连续错配。

(3) 引物3’端尽量避免出现发夹结构。

(4) 引物Tm值控制在60℃-72℃之间(推荐使用软件Primer Premier 5进行计算)。

(5) 引物额外附加序列,即与模板非配对序列,不应参与引物Tm值计算。

(6) 引物GC含量控制在40%-60%之间。

(7) 正向引物和反向引物Tm值以及GC含量尽可能一致。

暂未实现,敬请期待
暂未实现,敬请期待
货  号
G102
货  号
G103