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Plant Direct PCR Kit

货  号:
PD105-01/02
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¥
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Plant Direct PCR Kit

高效的植物直扩试剂盒

独特的超强耐受DNA聚合酶:经过定向进化改造的直扩DNA 聚合酶,对植物中的PCR 抑制物具有极强的耐受性,同时保持了极高的扩增性能。

宽广的样本兼容性:适合各种常见植物叶片及种子粗品的扩增。

极高的稳定性:反复冻融50 次活性未见明显降低。

操作便捷:无需繁琐的DNA 提取步骤,使用少量叶片或简单裂解,即可进行PCR,节约大量时间。

以研磨法所得烟草叶片粗品、拟南芥叶片粗品、小麦叶片粗品、水稻叶片粗品及玉米种子粗品为模板,同时以CTAB法提取的上述五种植物基因组DNA为对照,使用2 × Plant Direct Master Mix分别扩增长度为0.5 kb、2.0 kb、0.3 kb、1.5 kb、2.3 kb、0.8 kb、0.3 kb的7个不同目的片段,均可成功扩增。可见2 × Plant Direct Master Mix 宽广的样本兼容性及超强的抑制剂耐受性。

本产品适用于对植物叶片、种子等进行直接扩增,可用于非多糖、多酚类植物样品高通量筛选。经过定向进化改造的直扩DNA 聚合酶,对植物中的PCR抑制物具有极强的耐受性,同时保持了极高的扩增性能,适用于5 kb以内DNA 片段的扩增;试剂盒中的独特裂解缓冲液A可用于裂解新鲜或冻存的植物组织,操作简单,所得裂解物无需纯化即可作为扩增模板。裂解液中加入的保护剂使得粗品多次冻融后仍可有效扩增。预先配置的2 × Plant Direct Master Mix只需加入引物和模板即可进行扩增反应,减少了移液操作,提高了检测通量和结果的重现性。扩增产物为平末端,适用于ClonExpress® 和TOPOTM 快速克隆试剂盒(C112/C113/C115/C601)。

组 分

PD105-01 50 rxn (50 μl/rxn)

PD105-02 200 rxn (50 μl/rxn)

2 × Plant Direct Master Mix

1.25 ml

4×1.25 ml

Plant Direct Lysis Buffer A

5 ml

20 ml

Plant Direct Lysis Buffer B

5 ml

20 ml

2 × Plant Direct Master Mix 置于-20℃保存;

Plant Direct Lysis Buffer 可置于-20℃或2-8℃保存

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:使用植物叶片作为样本时如何处理样品?

A1:推荐使用50μl反应体系并使用直径大小为0.5-3mm的幼嫩叶片。较小反应体系和过多的叶片使用量容易导致扩增失败。

Q2:使用植物粗品作为样本时如何处理样品?

A2:可通过调整粗品处理方式和使用量来获得更优扩增效果。可尝试将Plant Direct Lysis Buffer A中的样本捣碎后于室温孵育3min;将加入的模板在0.5-5μl之间调整,或将粗品按1:1-1:10的比例进行稀释后,取1μl作为模板;需注意的是,植物样本和粗品中存在PCR反应抑制成分,加入过多模板容易一致反应导致扩增失败。对于难以扩增的样本,可尝试在Plant Direct Lysis Buffer A中加入终浓度为2%的β-巯基乙醇或10mM的DTT

Q3:无产物或产物量少。

A3:(1) 核对引物设计,确认引物的纯度和浓度。

(2) 重复实验,确认反应体系配制、反应程序设置无误。

(3) 增加循环数,或延长延伸时间。

(4) 提高Mg2+ 浓度。

(5) 设置退火温度梯度,找到合适的退火温度。

(6) 尝试不同的模板用量,增大反应体积或尝试使用BME/DTT。

Q4:有杂带或弥散条带。

A4:(1) 优化引物设计,降低引物浓度。

(2) 尝试提高退火温度或设置退火温度梯度,减少退火时间。

(3) 减少总循环数,延长时间不超过60sec/kb。

(4) 尝试不同的模板用量,增大反应体积或尝试使用BME/DTT。

暂未实现,敬请期待
暂未实现,敬请期待
货  号
PD101-01
货  号
PD103-01/02