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    2020-06-29 19:14:04
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Multiplex PCR Kit

MultiplexPCRKit特异性扩增可达19重多重性:检测重数可达19重甚至更高。均一性:扩增稳定均一,靶点偏好性极低。适应性:广泛兼容各种GC含量和长度的扩增子,随酶附赠GCEnhancer。特异性:扩增缓冲高度优化,最大程度上抑制非特异性扩增。 灵敏性:使用基因组DNA作为模板,扩增灵敏度可达1ng。MultiplexPCRKit具有值得信赖的扩增能力和灵敏度,能在默认条件下高效完成绝大多
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¥
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货号:
PM101-01/02/03
所属分类
多重PCR
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-
+
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组分
说明书

Multiplex PCR Kit

多重性:检测重数可达19重甚至更高

均一性:扩增稳定均一,靶点偏好性极低。

适应性:广泛兼容各种GC含量和长度的扩增子,随酶附赠GC Enhancer

特异性:扩增缓冲高度优化,最大程度上抑制非特异性扩增。

灵敏性:使用基因组DNA作为模板,扩增灵敏度可达1 ng

Multiplex PCR Kit具有值得信赖的扩增能力和灵敏度,能在默认条件下高效完成绝大多数多重扩增反应。如图所示,以人基因组为模板进行19重检测,扩增子长度范围为70 bp-916 bp。可见,在1 ng-500 ng的模板量范围内Multiplex PCR Kit都可以均一的对各位点进行多重扩增。

M: 100 bp DNA Ladder

 

Multiplex PCR Kit具有优秀的片段长度兼容性。如图所示,以小鼠基因组DNA为模板,扩增1.55 kb、1.07 kb、0.45 kb三个长度差异较大的目标位点。可见,试剂盒能在单个反应体系中兼顾各种长度的扩增子。

1:三重PCR;2-4:单重PCR;5-7:两重PCR。

M: DL5,000 DNA Marker

组分

PM101-01

PM101-02

PM101-03

Multiplex DNA Polymerase

50 μl

200 μl

 

PM101-02 × 5

2 × Multiplex Buffer

1.25 ml

4 × 1.25 ml

5 × Multiplex GC Enhancer

700 μl

4 × 700 μl

所有组分-20°C保存,有效期一年。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:PM101一次可以扩多少个片段?是否有5’-3’外切酶活性?

A1:一次可以扩19个片段,有5’-3’外切酶活性。

Q2:跑胶后发现条带数量比目的条带数量少。

A2:可能和本身扩增长度有关系,有的条带之间大小太接近。建议通过重新跑胶看一下能不能区分开条带,胶浓度2.5%,用80V电压跑大长胶。

Q3:PM101的扩增产物是平末端还是粘性末端?

A3:粘性末端。

Q4:扩增产物少或没有扩增。

A4:(1) 确认PCR程序预变性条件为95℃ 5 min,以充分释放Multiplex DNA Polymerase活性。

(2) 使用高质量的引物,检查引物是否降解,确认引物浓度为0.1 μM

(3) 增加PCR循环数。

(4) 降低退火温度(间隔1-3℃),必要时进行退火温度梯度尝试。确认退火时间为90 sec,必要时可延长退火时间至3 min。

(5) 检查单对引物的扩增性能和特异性。

(6) 扩增子高GC或含有复杂二级结构时,推荐尝试Multiplex GC Enhancer,添加终浓度为0.5 - 1.0 ×。

(7) 使用高质量的模板;确认DNA模板纯度、浓度;增加模板使用量。

(8) 产物过长,重新设计引物。

(9) 延长循环内延伸时间、延长彻底延伸时间。

(10) 提高低产或缺失扩增子引物使用量。

Q5:存在非特异性扩增。

A5:(1) 减少循环数。

(2) 提高退火温度。

(3) 减少引物使用量。

(4) 重新设计引物。

(5) 扩增子高GC或含有复杂二级结构时,推荐尝试Multiplex GC Enhancer,添加终浓度为0.5 - 1.0 ×。

Q6:电泳时条带模糊。

A6:(1) 减少循环数(每次减少3个循环)。

(2) 减少起始模板量。

(3) 延长彻底延伸步骤时间至15 - 30 min。

(4) 降低电泳电压,更换新的电泳缓冲液。

Q7:跑PAGE胶,有很多弥散条带,有时候还有微笑条带。

A7:建议延长延伸时间,降低循环数。

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