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Ribo-off Globin & rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat)

科学研究试剂

高通量测序文库构建试剂

药物研发试剂

  • N408-说明书.pdf

    大小:
    2021-04-28 14:18:14
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Ribo-off Globin & rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat)

价格:
¥
12240.0
市场价
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N408
所属分类
RNA模块
数量:
-
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库存:
19998
暂时无货
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组分
说明书

Ribo-off ® Globin & rRNA Depletion Kit (Human/Mouse/Rat)

珠蛋白(Globin) mRNA及rRNA去除试剂盒

低质量RNA样本高效去除效率

起始量低至 10 ng

Ribo-off Globin & rRNA Depletion Kit(Human/Mouse/Rat)是针对血液样本总RNA中去除珠蛋白(Globin)mRNA及rRNA的试剂盒。本试剂盒适用于起始模板量为0.01 - 1 μg的血液总RNA,总RNA样本经过Globin mRNA和rRNA与探针杂交、RNase H消化、DNase I消化等步骤,最终将Globin mRNA及rRNA(包括细胞质rRNA和线粒体rRNA)从总RNA中去除,保留其它mRNA以及非编码RNA,可用于LncRNA等非编码RNA的分析;本试剂盒可兼容部分降解的RNA样本,所得到的产物适用于RNA文库构建及其它实验。

1. 不同物种、不同起始量模板

以Human、Mouse 以及 Rat Blood RNA 为起始模板,分别进行不去除和使用 N408、N*公司(#E7***L)、K*公司(K***78)同类产品进行 rRNA 去除,随后均使用 VAHTS® Universal V8 RNA-seq Library Prep Kit for Illumina(NR605)进行链特异性转录组文库构建。经测序分析rRNA与Globin mRNA在下机数据中的占比。评判指标:rRNA ratio≤5%+1%;Globin mRNA ratio ≤1%+0.5%。
 

不同起始量(Human)

不同物种(100 ng)

图1. 不同起始量、不同物种Globin mRNA及rRNA去除情况

结果表明:不同起始量(1 µg-10 ng)、不同物种的样本,N408均能高效去除目标 RNA。

2. 不同RIN值模板

以100 ng不同RIN值的Human Blood RNA为起始模板,分别进行不去除和使用N408、N*公司(#E7***L)、K*公司(K***78)和 Q*公司(3***80)同类产品进行 rRNA 去除,随后均使用 VAHTS® Universal V8 RNA-seq Library Prep Kit for Illumina(Vazyme #NR605)进行链特异性转录组文库构建。经测序分析rRNA与Globin mRNA在下机数据中的占比。

图2. 不同RIN值样本Globin mRNA及rRNA去除情况

-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

1. 纯化产物可以如何保存?

答:纯化产物由于浓度较低容易降解,去除Globin mRNA 和rRNA的样品应尽快进行下游实验,否则 于-80 ~ -65 ℃保存。

2. 如果纯化产物用于文库构建,但是使用的是Nuclease-free ddH2O洗脱,如何操作?

答:使用VAHTS Universal V8 RNA-seq Library Prep Kit for Illunima (Vazyme #NR605)时,若条件允许,加入等体积的VAHTS 2 × Frag/Prime Buffer (Vazyme #N402 ),之后反应体系均放大,直至做到纯化步骤,恢复体系;也可以再次使用VAHTS RNA Clean Beads (Vazyme #N412)进行纯化,最后用Frag/Prime Buffer洗脱。

3. 如果起始文库浓度过低,可以从哪些角度去寻找原因并如何改进?

答:Globin mRNA & rRNA去除后RNA的产量取决于起始RNA的质量、样品中rRNA的含量和使用的纯化方法。以高质量的RNA样品为模板构建得到的文库浓度均能达到上机测序要求,如果无法提取合格的RNA样品,可以尝试使用以下方法弥补:①起始量:提高样品起始量,上限1 μg;②做几个重复的样品,到纯化步骤后合并在一起;③做不分选方案:94℃ 8 min打断条件下RNA片段虽然偏小,但是分布会集中,均一性也较好。

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