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RNA isolater Total RNA Extraction Reagent

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    2020-06-30 23:39:26
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RNA isolater Total RNA Extraction Reagent

RNAisolaterTotalRNAExtractionReagent细胞/组织中总RNA提取试剂基于异硫氰酸胍和酚,裂解能力强。优化的裂解液配方,具有广泛的样本适应性样本。 RNAisolater TotalRNAExtractionReagent基于异硫氰酸胍和酚,具有极强的裂解能力,可在短时间内裂解细胞和组织样本,及时保护RNA的完整性。RNAisolater 总RNA提取试剂广泛适用于培
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组分
说明书

RNA isolater Total RNA Extraction Reagent

细胞/组织中总RNA提取试剂(Trizol 法)

基于异硫氰酸胍和酚,裂解能力强。

优化的裂解液配方,具有广泛的样本适应性。

RNA isolater Total RNA Extraction Reagent基于异硫氰酸胍和酚,具有极强的裂解能力,可在短时间内裂解细胞和组织样本,及时保护RNA的完整性。RNA isolater 总RNA提取试剂广泛适用于培养细胞、动物组织。

组 分

R401-01

RNA isolater Total RNA Extraction Reagent

100 ml

4℃避光保存 

关键词:
细胞/组织中总RNA提取试剂
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Q1:RNA降解。

A1:(1) 组织样本保存不当。RNA提取时要选新鲜组织或细胞样本,若为冻存样本,尽量避免反复冻融。样品离开活体或原来的生长环境后,样品中的内源RNase开始降解RNA,降解速度与内源RNase的含量及温度有关。

(2) 投入样本较多,导致裂解不充分。试剂不能有效抑制样品中所有的RNase。

(3) RNA保存时间过久,发生降解。对提取的RNA进行纯度和完整度检测,分管在-80℃长期保存或在-20℃短期保存,尽快使用,避免反复冻融。

Q2:组织样本应该如何保存。

A2:方法一:组织离体后迅速投入液氮冷冻,并用液氮保存。或待冻结后,将样本转移至 -80℃保存。注意:不能直接将新鲜组织直接放入 -80℃冷冻,否则样品的冻结会是一个缓慢的过程,在这个过程中内源 RNase 足以将 RNA 降解。

方法二:将新鲜组织充分浸泡于RNA Keeper® Tissue Stabilizer(R501)中,可在室温存放一周,4℃存放一个月,-20℃/-80℃长期保存。

Q3:提取的RNA有基因组DNA污染。

A3:(1) 向裂解液中加入氯仿后,需要在低温下(2-8℃)高速离心。离心后,RNA被抽提到上层的水相中,中、下层是有机相,含有氯仿,DNA即存在于中层。氯仿在常温下会与水以一定比例互溶,因此,常温离心会导致上层水相中也有少量基因组DNA的污染。吸取上层液体时,应非常小心,避免吸到中间层和下层。

(2) RNA样品中的少量基因组DNA残留,也可以通过后续逆转录反应前的基因组去除步骤进行去除,gDNA wiper能够高效去除100 ng基因组DNA。

Q4:加入异丙醇离心后无沉淀。

A4:RNA含量可能较低。建议加入异丙醇后在4℃或-20℃放置10-30 min后再离心。若依然看不见沉淀,在后面弃上清的操作时,采用吸取而不是倾倒的方法,以免沉淀丢失。

Q5:能否用于原核生物RNA的提取。

A5:可以,需配合R402(Bacteria RNA Plus Reagent)同时使用,可大幅提高原核生物RNA提取产量,同时保证良好的产物质量。

Q6:细胞样本比较少,该如何操作。

A6:裂解的过程中需要反复吹打细胞确保与裂解液充分混匀,冰上静置10 min。加入氯仿后需要剧烈振荡15s(难裂解的样品涡旋15s),然后在冰上静置5-10 min后离心,后续就常规沉淀提取。

Q7:液氮研磨组织时,若组织变为冻霜状,比较粘连,该如何操作。

A7:将组织液氮研磨成粉末后,转移至提前在液氮中预冷的EP管中,加入RNA isolater后用枪上下吹直至将絮状物吹散后,进行后续实验。同时可以减小研磨组织的体积,大小等同于指甲盖一半的体积,减少絮状物的产生。

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