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    DD4201-说明书.pdf

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    2021-05-14 14:08:56
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T7 High Yield RNA Transcription Kit

零售价
¥
2300.0
市场价
0.0
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产品编号
DD4201
所属分类
酶原料
数量
-
+
库存:
199998
1
产品详情
FAQ
组分
说明书

T7 High Yield RNA Transcription Kit进行了转录反应体系的优化,使用户能够通过体外转录反应高效地获得大量RNA产物。试剂盒使用T7 RNA聚合酶,以含有T7启动子序列的线性双链DNA为模板,NTPs为底物对启动子下游DNA序列进行转录,获得单链RNA。本试剂盒也能够以修饰核苷为底物产生染料、生物素或者放射性标记的RNA;以帽子结构或者帽子类似结构为底物产生加帽的RNA。

本试剂盒一个反应(20 μl体系)能够获得150 - 200 μg RNA产物,并可放大用于产生毫克级别RNA。转录合成的RNA可用于如RNA结构与功能研究、RNA酶保护、探针杂交、RNAi等应用,也可通过牛痘病毒加帽系统(Vazyme #DD4109)和2'-O-Methyltransferase(Vazyme #DD4110)加帽,E.coli Poly(A)Polymerase(Vazyme #DD4111)加尾产生mRNA,用于体外翻译、转染、显微注射或其他下游应用。

组分

DD4201-01 (50 rxns)

DD4201-02 (100 rxns)

T7 RNA Polymerase Mix

100 μl

200 μl

10 × Reaction Buffer

100 μl

200 μl

ATP Solution

100 μl

200 μl

UTP Solution

100 μl

200 μl

GTP Solution

100 μl

200 μl

CTP Solution

100 μl

200 μl

DNase I

50 μl

100 μl

Control Template (0.5 μg/μl)

10 μl

20 μl

RNase-Free ddH2O

1 ml

2 ml

 

-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:转录产物产量低
A1:模板与产量密切相关,实验组产量明显低于对照组,可能原因:①实验模板中有抑制反应的成分;②实验模板本身原因。建议a. 重新纯化模板;b. 确定模板定量以及完整性;c. 延长37℃反应时间;d. 加大模板投入量;e. 尝试其他的启动子和RNA聚合酶。


Q2:短片段转录产物产量
A2:转录起始片段短会抑制反应,转录产物小于0.3 kb时,延长反应时间或增加模板量可以提高RNA产量。16 h过夜反应或者使用2 μg模板可以使RNA产量最大化。


Q3:产物电泳拖尾现象
A3:电泳过程中有拖尾现象,可能原因:

①实验操作过程被RNase污染;

②DNA模板被RNase污染。体系中的RNase抑制剂只能抑制痕量的RNase残留,建议重新纯化模板DNA,并在实验过程中使用RNase-Free的枪头和EP管,佩戴一次性乳胶手套和口罩,所有试剂均用RNase-Free ddH2O配制。


Q4:RNA产物片段大于预期
A4:如果电泳显示产物条带大于预期,可能原因:①质粒模板可能没有完全线性化;②线性化模板有义链3'末端突出;③RNA存在未完全变性的二级结构。建议确认模板结构,并通过变性电泳的方式确认实验结果。


Q5:RNA产物片段小于预期
A5:如果电泳显示产物条带小于预期,可能原因:①模板序列中包含类似T7 RNA聚合酶终止序列;②模板GC含量高形成高级结构;③RNase污染。不同的聚合酶识别不同的终止序列,若模板中含终止序列,建议尝试不同的RNA聚合酶;如果模板GC含量较高,建议加入SSB蛋白以提高转录效率。
 

组分

DD4201-01 (50 rxns)

DD4201-02 (100 rxns)

T7 RNA Polymerase Mix

100 μl

200 μl

10 × Reaction Buffer

100 μl

200 μl

ATP Solution

100 μl

200 μl

UTP Solution

100 μl

200 μl

GTP Solution

100 μl

200 μl

CTP Solution

100 μl

200 μl

DNase I

50 μl

100 μl

Control Template (0.5 μg/μl)

10 μl

20 μl

RNase-Free ddH2O

1 ml

2 ml

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