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T7 High Yield RNA Transcription Kit (N¹ -Me-Pseudo UTP)

科学研究试剂

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    T7 High Yield RNA Transcription Kit...-V21.1.pdf

    大小:
    2021-06-24 14:36:02
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T7 High Yield RNA Transcription Kit (N¹ -Me-Pseudo UTP)

零售价
¥
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市场价
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产品编号
DD4202-01/02
所属分类
酶原料
数量
-
+
库存:
100998
1
产品详情
FAQ
组分
说明书

T7 High Yield RNA Transcription Kit(N1 -Me-Pseudo UTP)进行了转录反应体系的优化,使用 户能够通过体外转录反应高效地获得大量N1 -Me-Pseudo UTP 修饰的RNA产物。修饰核苷酸 (N1 -Me-Pseudo UTP)的添加可以减少宿主细胞的免疫反应。该试剂盒使用T7 RNA聚合酶,以 含有T7启动子序列的线性双链DNA为模板,NTPs为底物对启动子下游DNA序列进行转录,获得 单链RNA。本试剂盒也能够以不同修饰核苷酸为底物产生染料、生物素或者放射性标记的RNA; 以帽子结构或者帽子类似结构为底物产生加帽的RNA。

本试剂盒一个反应(20 μl体系)能够获得150 - 200 μg RNA产物,并可放大用于产生毫克级别RNA。 转录合成的RNA可用于如RNA结构与功能研究、RNA酶保护、探针杂交、RNAi等应用,也可通 过牛痘病毒加帽系统(Vazyme #DD4109)和2'-O-Methyltransferase(Vazyme #DD4110)加帽, E.coli Poly(A)Polymerase(Vazyme #DD4111)加尾产生mRNA,用于体外翻译、转染、显微注 射或其他下游应用。

-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:转录产物产量低

A1:模板与产量密切相关,实验组产量明显低于对照组,可能原因:

①实验模板中有抑制反应的成分;

②实验模板本身原因。建议

a. 重新纯化模板;

b. 确定模板定量以及完整性;

c. 延长37℃反应时间;

d. 加大模板投入量;

e. 尝试其他的启动子和RNA聚合酶。

Q2:短片段转录产物产量

A2:转录起始片段短会抑制反应,转录产物小于0.3 kb时,延长反应时间或增加模板量可以提高RNA产量。16 h过夜反应或者使用2 μg模板可以使RNA产量最大化。

Q3:产物电泳拖尾现象

A3:电泳过程中有拖尾现象,可能原因:

①实验操作过程被RNase污染;

②DNA模板被RNase污染。体系中的RNase抑制剂只能抑制痕量的RNase残留,建议重新纯化模板DNA,并在实验过程中使用RNase-Free的枪头和EP管,佩戴一次性乳胶手套和口罩,所有试剂均用RNase-Free ddH2O配制。

Q4:RNA产物片段大于预期

A4:如果电泳显示产物条带大于预期,可能原因:

①质粒模板可能没有完全线性化;

②线性化模板有义链3'末端突出;

③RNA存在未完全变性的二级结构。建议确认模板结构,并通过变性电泳的方式确认实验结果。

Q5:RNA产物片段小于预期

A5:如果电泳显示产物条带小于预期,可能原因:

①模板序列中包含类似T7 RNA聚合酶终止序列;

②模板GC含量高形成高级结构;

③RNase污染。不同的聚合酶识别不同的终止序列,若模板中含终止序列,建议尝试不同的RNA聚合酶;如果模板GC含量较高,建议加入SSB蛋白以提高转录效率。

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