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VAHTS RNA Multi-PCR Library Prep Kit

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    NA211说明书-V22.1.pdf

    大小:
    2023-01-05 09:31:04
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VAHTS RNA Multi-PCR Library Prep Kit

用于测序分析病毒RNA基因组遗传信息的试剂盒
价格:
¥
999999.0
市场价
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货号:
NA211-01/02
数量:
-
+
库存:
1998
*具体价格咨询当地业务员
暂时无货
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产品详情
FAQ
组分
说明书
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病毒RNA基因组遗传信息分析;病毒RNA建库

·  操作简便:采用两轮 PCR 方法,全流程低至 5 h

·  优异的覆盖度:定制的 Panel 对病毒全基因组的覆盖度达到 99.7%

VAHTS RNA Multi-PCR Library Prep Kit是基于多重扩增建库原理,用于测序分析病毒RNA基因组遗传信息的试剂盒。本试剂盒包含完整逆转录模块和多重PCR扩增建库模块,其中文库构建采用两轮PCR方法,完成基因组靶向扩增及富集。从获得病毒基因组样本到完整上机文库全流程耗时低至5 h,其中手动操作时间小于1.5 h。本产品兼容起始模板范围16 - 38 CT,构建好的文库适用于Illumina高通量测序平台进行测序分析。

本试剂盒定制的Panel对病毒全基因组的覆盖度达到99.7%,能够有效地用于检测出基因组突变及缺失位点。本试剂盒的优化组合使结果更加稳定、可靠,帮助研究者和检测人员简便、快速、高质量地完成病毒RNA建库。试剂盒中提供的所有试剂均经过了严格的质量控制和功能验证,较大程度上保证了文库构建的稳定性和重复性。

1. 广泛的样本投入量

以不同拷贝数的病毒 RNA 为起始模板,参照 NA211、A、B、C公司同类产品的建库流程进行文库构建,使用 Qubit 检测文库浓度。

图1. 不同投入量下的文库产量

在不同模板投入量下(病毒 RNA 的 CT 值分别为 20.6、23.8、26.7、30.4、34.2、38.1),NA211 均能高效建库。

 

2. 优异的覆盖度

以不同拷贝数的病毒 RNA 为起始模板,参照 NA211、A、C公司同类产品的建库流程进行文库构建,PE150 测序,测序数据量10 M Clean reads 进行分析。

图2. 不同投入量下的文库覆盖度

在不同模板投入量下,NA211表现出优异的病毒全基因组的覆盖度。CT=16-30,测序覆盖度>99%;CT=30-32,测序覆盖度>98%;CT=32-38,样本可检出。

-30 ~ -15℃保存,≤0℃运输。

关键词:
vahts
病毒
文库
覆盖
基因组
测序
不同
rna
ct
模板
NA211-00
未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

1. 文库产量偏低 
① 重新定量投入模板量,确认模板起始量是否正确。若低于下限(RNA浓度阈值大于38 CT),需提高投入模板量(建议最佳RNA拷贝数区间为20 - 35 CT)。 
② 若模板质量较差,可适当提高循环数或使用高质量模板。 
③ 请确认每一步体系以及程序是否按照说明书进行,并注意每一步骤中各项操作细节。 
④ 文库纯化磁珠干燥环节,不能时间过长导致磁珠过于干燥,过于干燥也会降低产量。 
⑤ 进行文库扩增时,需确保无磁珠残留,否则可能抑制扩增反应。 
⑥ qPCR文库定量时,请确保循环时间以及循环数正确。 


2. 接头二聚体较高 
① 当投入中低浓度模板时(CT = 30 - 38),因为可捕获的模板较低,多重扩增引物、接头引物之间不可避免地产生二聚体,按照推荐数据量的两倍进行测序。 
② 当投入中低浓度模板时(CT = 30 - 38),在不影响覆盖度的前提下,可以将第二轮扩增引物体积减半投入,或者降低第二轮扩增的循环数,能够有效地减少引物/接头二聚体。 
③ 本产品所建文库主峰与引物/接头二聚体存在约200 bp的间隔,峰形特异且不连续。单纯的引物/接头二聚体可以通过生信手段过滤掉,并不影响测序的覆盖度。 


3. 文库均一性较差 
① 多重扩增循环数可适当降低。 
② 模板拷贝数偏多,可适当降低至20 - 35 CT范围内。 


4. 为什么需要分区操作 
① PCR产物极易产生气溶胶污染,进而导致实验结果不准确、可信度不高等问题。因此,我们推荐您将PCR反应体系配制区和PCR产物纯化区进行强制性的物理隔离,使用专用的移液器等设备,并定时对各实验区域进行清洁(使用0.5%次氯酸钠或10%漂白剂进行擦拭清理), 以保证实验结果的可信度。

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