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miRNA Universal SYBR qPCR Master Mix

miRNAUniversalSYBR®qPCRMasterMixmiRNA染料法定量专用预混液超高的扩增特异性:基于化学法热启动的AceTaq® DNAPolymerase,95°C前完全封闭酶活,配以专利特异性促进因子Exactor,扩增更特异。优越的反应体系:最适的Buffer组分及浓度,更适用于microRNA的逆转录及qPCR实验。宽广的平台兼容:miRNAUniversalSYBR® q
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说明书

miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mix

miRNA染料法定量专用预混液

超高的扩增特异性:基于化学法热启动的AceTaq® DNA Polymerase,95°C前完全封闭酶活,配以专利特异性促进因子Exactor,扩增更特异。

优越的反应体系:最适的Buffer 组分及浓度,更适用于microRNA的逆转录及qPCR 实验。

宽广的平台兼容:miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mix中添加通用型ROX使得mix能够在兼容不同平台qPCR仪器,而无需进行ROX浓度调整。

图1. 超高的扩增特异性

microRNA 序列短,同一家族不同成员序列极其相似,有些仅有单个碱基差别,因此特异性对 microRNA 定量至关重要。miRNA Universal SYBR ® qPCR Master Mix 以化学法热启动 AceTaq ® DNA Polymerase 为核心酶,配以优化的Buffer,能够最大限度区分 microRNA 同一家族不同成员间单个碱基的差异,实现高特异性定量。

图2. 卓越的扩增灵敏度

以 HeLa 细 胞 Total RNA 为 模 板 逆 转 录, 扩 增 hsa-miR-15、hsa-miR-29、hsa-miR-155、hsa-miR-200 基 因; 以 小 鼠 肝 脏组织 Total RNA 样本进行逆转录,扩增 mmu-miR-16、mmu-miR-20、mmu-miR-21 基因。结果显示,与同类产品相比,miRNA 1st Strand cDNA Synthesis Kit (by stem-loop) (Vazyme #MR101) 配 套 miRNA Universal SYBR ® qPCR Master Mix (Vazyme #MQ101) 的反应体系,均有优异的表现。

图3. 宽广的平台兼容性

使用miRNA Universal SYBR ® qPCR Master Mix(Vazyme #MQ101) 在不同qPCR 仪上扩增同一基因,在StepOnePlusTM、QuantStudio TM 3、CFX Connect 均具有优秀的定量结果,说明Vazyme #MQ101 仪器适用性广,无需针对不同仪器调整 ROX 浓度。

本产品是使用SYBR® Green I嵌合荧光法进行miRNA定量反应的专用预混液。由于miRNA序列短,且同一家族的miRNA序列往往高度相近,故在定量时对特异性要求极高。本品基于化学法热启动的AceTaq® DNA Polymerase,配以优化的Buffer,能够极大地减少非特异性扩增;同时,特殊的ROX Reference Dye,使得预混液适应于所有qPCR仪器,无需在不同的仪器上调整ROX浓度,只需在配制反应体系时加入引物和模板即可进行扩增。

组分

MQ101-01

125 rxn (20 μl reaction)

MQ101-02

500 rxn (20 μl reaction)

2 x miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mixa

1.25 ml

4 x 1.25 ml

MQ Primer R(10um)b

70ul

250ul

a.包含dNTP,Mg2+,AceTaq DNA Polymerase,SYBR Green I,Specific ROX Reference Dye等。

b.序列为AGTGCAGGGTCCGAGGTATT

- 20℃避光保存

关键词:
miRNA Universal SYBR® qPCR Master Mix
miRNA染料法定量专用预混液MQ101-01
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Q1、采用其他软件设计的茎环逆转录引物及定量引物,能否使用Vazyme #试剂盒(MR101+MQ101)?

A1:可以的。逆转录时可参照说明书直接投入其他软件设计的茎环逆转录引物(2μM浓度),且后续定量实验直接投入相应的定量上下游引物即可。注:若其他软件默认的茎环引物与Vazyme miRNA 引物软件默认的相同,后续搭配MQ101无需合成反向引物,可以使用MQ101自带的mQ Primer R;若茎环引物序列不同,则MQ101提供的mQ Primer R无需使用,需合成正反向引物。

Q2、内参是否需要设计茎环引物及如何逆转录和定量的引物如何使用?

A2:若选择U6等较长的基因作为内参基因,由于序列相对较长,无需设计茎环逆转录引物,直接使用常用的Primer Premier 5等软件设计即可,逆转录时投入内参下游引物(2μM浓度),且后续定量实验直接投入内参的上下游引物即可。如果选择长度较短的miRNA作为内参,需要设计茎环引物进行逆转录,推荐使用Vazyme miRNA 引物设计软件设计逆转录引物和qPCR引物。

Q3、如果要研究多个miRNA定量实验,是不是每个miRNA均要单独设计一条茎环引物进行逆转录?

A3:是的,针对每个miRNA都要设计一条茎环逆转录引物,一管反应中只能逆转一个miRNA(内参也是一样),即不同逆转录引物均需要分管逆转录。

Q4、在逆转录时,多个茎环逆转录引物/内参引物是否可以在同一管中进行?

A4:不推荐。在一管中同时投入多个茎环逆转录引物进行多个miRNA逆转录时,不同特异性茎环引物茎环结构之间会产生相互干扰和影响。

Q5、逆转录体系应该投入多少RNA?

A5:如果提取的是Total RNA,MR101可以兼容10 pg-1 μg的RNA投入量,但是不同miRNA表达丰度不同,建议尽量投入0.5-1 μg RNA。如果提取的是miRNA,逆转投入量参考1/10-1/5 total RNA的量加入,具体还是要根据目标miRNA的丰度来调整。

Q6、miRNA为什么要合成茎环引物?

A6:因为miRNA较短,如果使用普通逆转录和定量方法,无法设计定量引物,需要在逆转录阶段将cDNA延长

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