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AceQ Universal U+ Probe Master Mix V2

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Q513-02/03
价  格:
¥
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AceQ® Universal U+ Probe Master Mix V2

基于 Heat-labile UDG 防污染的通用型探针法定量 PCR 检测试剂盒

卓越的扩增灵敏度:严谨的化学法热启动酶 Acetaq®DNA Polymerase,配合精心优化的缓冲体系,可以检测出低至单拷贝模板

优秀的线性关系:在宽广的模板区间内具有良好的线性关系,扩增效率高达 99%

dUTP/UDG 防污染系统:引入 Heat-Labile UDG 防污染体系, Heat-labile UDG 在室温下即可将含 U 的污染物迅速降解,完全消除了扩增产物污染对 qPCR 反应的影响

广泛的平台适用性:特殊的 ROX 参比染料,适用于所有 qPCR 仪,无需在不同的 QPCR 仪器上调整 ROX 浓度

图1.优秀的线性关系

以质粒 Puc57-Kan 为模板,进行 7 个 10 倍梯度稀释,第 7 个稀释梯度中质粒拷贝数浓度约为 8 copies/4 μl。使用 AceQ® Universal U + Probe Master Mix V2(Vazyme #Q513)对各稀释梯度中的 Puc57-Kan 进行检测,每孔模板使用量为 4 μl。可以看到,Vazyme #Q513 预混液在宽广的模板量区间内具有优秀的线性关系,可以轻松检测出个位数拷贝的待测模板。

图2.dUTP/Heat-labile UDG 防污染系统

AceQ ® Universal U + Probe Master Mix V2 (Vazyme #Q513)引入 dUTP/ Heat-labile UDG 防污染系统,室温条件下即可有效清除体系中存在的污染物,同时当反应体系升温至 50℃-55℃时,Heat-labile UDG 迅速彻底失活,可维持 cDNA 的完整性,确保检测灵敏度不受影响。在反应体系内分别添加 4 /40 /400 pg 的含 U 模板,测试 Vazyme#Q513 预混液对污染模板的清除效率。结果可见,Vazyme#Q513 预混液对污染模板的清除效率高达 99.6% 以上,可有效保证实验结果的准确度。

图3.广泛的平台适用性

以 HeLa 细胞 cDNA 为模板,进行 3 个 10 倍梯度稀释,使用AceQ ® Universal U + Probe Master Mix V2 (Vazyme #Q513)在 不 同 类 型 qPCR 仪 ( 机 型:StepOnePlusTM 、LightCycler® 96、QuantStudioTM 6) 上扩增不同稀释梯度 cDNA 的 GAPDH基因,定量结果优秀。说明 Vazyme #Q513 预混液仪器适用性广,无需针对不同仪器调整 ROX 浓度。

AceQ®Universal U+ Probe Master Mix V2 采用严谨的化学修饰 Acetaq, 配合精心优化的缓冲体系,能够极大程度提高探针法定量的灵敏度。 AceQ®Universal U+ Probe Master Mix V2 添加了dUTP/UDG 防污染系统,降低因探针法的高灵敏度造成的假阳性, 最大限度保证了结果的真实性。同时, AceQ®Universal U+ Probe Master Mix V2 还采用了特殊的 ROX Passive Reference Dye,适用于所有的 qPCR 仪,无需调整ROX 浓度,使用方便。

组分

Q513-02

500 rxn/20 μl reaction

Q513-03

2,500 rxn/20 μl reaction

AceQ® Universal U+ Probe Master Mix V2*

4x1.25 ml

5xQ513-02

*包含dNTP/dUTP Mix,Mg 2+ ,AceTaq®DNA Polymerase,Heat-labile UDG,Specific ROX ReferenceDye。

- 20℃避光保存

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

1.绝对定量标准曲线线性关系不佳

a) 加样误差:加大模板稀释倍数,提高加样体积

b) 标准品降解:重新制备标准品,重复实验

c) 模板浓度太高:增加模板稀释倍数

2.在定量时,如何判断cDNA 投入量

首次得到的cDNA 需要进行多个梯度稀释, 将不同梯度稀释的cDNA 进行qPCR 定量, 选取CT 值落在18-28,或者15-33 范围内的扩增曲线对应的cDNA 的稀释梯度作为后续该基因的参考稀释度。(CT 值在18-28,或者15-33 区间范围被认为是准确的 )    

3.如何确定基因表达量高低

如果基因扩增CT 值超过30,使用PCR 产物通过梯度稀释创建标准曲线,判断该引物扩增效率,若扩增效率满足90-120%,则可以判断该基因扩增CT 值偏大是由于基因表达量低所致

4.阴性对照出现明显扩增

a) 反应体系污染:更换新的Mix、水、引物重复实验。反应体系在超净工作台内配制,减少气溶胶污染

b) 引物二聚体的出现:配合融解曲线进行分析

5.CT 值出现太晚

a) 扩增效率极低:优化反应条件,尝试三步法扩增程序,或者重新设计合成引物

b) 模板浓度太低:减少稀释度重复实验,一般未知浓度的样品先从最高浓度做起

c) 模板降解:重新制备模板,重复实验

d) PCR 产物太长:推荐PCR 产物长度为80 bp-150 bp

e) 体系中存在PCR 抑制剂:一般为模板带入,加大模板稀释倍数或者重新制备模板重复实验

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