搜索
搜索

科技成就健康生活

 

产品

科研试剂

产品分类

高通量试剂

药物研发试剂

分子诊断试剂

动物疫病诊断

生物耗材

原料和解决方案

  • cp

    R021说明书-V22.1.pdf

    大小:
    2022-05-27 10:34:23
1/1
浏览量:
3282

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase

稳定可靠的逆转录酶
价格:
¥
400.0
市场价
400.0
浏览量:
3282
货号:
R021-01
数量:
-
+
库存:
9999
*具体价格咨询当地业务员
暂时无货
1
产品详情
FAQ
组分
说明书
相关文献

M-MLV (H-) Reverse Transcriptase

稳定可靠的逆转录酶

逆转录;第一链合成;较长的cDNA合成;全长cDNA文库的构建;5' RACE

·  cDNA产物较长:点突变消除RNase H活性以获得长的cDNA产物
·  可靠的逆转录效率:对于100ng以上的RNA模板具有稳定可靠的逆转录表现
·  适用性广:可用于5’-RACE反应以及cDNA文库构建等实验
·  合成片段≤5 kb

野生型M-MLV (Moloney Murine Leukemia Virus) 具有以下几种活性:依赖于RNA 的DNA 聚合酶活性,依赖于DNA 的DNA 聚合酶活性和RNase H 活性。由于RNase H 活性能够催化降解RNA/DNA 杂合体中的RNA,因此在cDNA 第一条链的合成反应中可能会降解模板RNA。

本产品是通过定点突变得到的RNase H 活性缺失的M-MLV 突变体。与常见的通过删除(deletion) RNase H 结构域方法得到的突变体相比,本产品保留了完整的蛋白结构,因此具有与野生型相同的聚合酶活性,可用于较长的cDNA 合成以及全长cDNA 文库的构建,同时具有末端转移酶活性,可用于5' RACE等实验。

-30 ~ -15℃保存。

关键词:
R021
逆转录酶;RT酶;M-MLV逆转录酶;逆转录单酶;反转录酶;M-MLV(H-);通用型逆转录酶;逆转录;反转录;逆转录PCR酶;反转录PCR酶
未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:原核生物RNA能用我们的逆转录试剂吗?

A1:可以。原核生物RNA没有polyA尾,所以在逆转录反应体系中需要以Random primer作为逆转录引物。

 

Q2:延长逆转录时间,是否可以提高逆转录效率?

A2:对于大多数基因,延长逆转录时间对逆转录效率并没有显著提升;对于一些GC含量较高或含高级结构的模板,延长逆转录时间可提升逆转录效率。

 

Q3:如何评判RNA质量?

A3:RNA质量从两个方面反应:

(1) RNA完整度。通过琼脂糖凝胶电泳验证RNA完整度。以真核生物为例,完整的总RNA有清晰的三条带,分子量从大到小分别为28S、18S、5S,并且28S是18S亮度的两倍;若能看见三条带,但带型模糊或弥散,则说明RNA有部分降解,此时请立即进行逆转录反应,并适量加大模板量;若只能看见分子量很小的一条带或没有条带,则 RNA 已完全降解,需要重新提取。

(2) RNA的纯度。RNA的纯度可以通过OD260/280和OD260/230两个比值是否在1.8-2.1范围内进行判断,蛋白、离子等残留会使比值降低。

 

Q4:如何选择逆转录的引物?

A4:根据实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT或基因特异性引物进行逆转录。

(1) 随机引物:随机结合在RNA的任何区域,适用于rRNA、mRNA、tRNA等所有RNA类型的逆转录反应。

(2) Oligo dT:适用于具有PolyA尾的RNA(原核生物RNA、真核生物的rRNA和tRNA不具有PolyA尾)。 由于Oligo dT结合在PolyA尾上,所以对 RNA 样品的质量要求较高,即使有少量的降解也会使全长cDNA合成量大大减少。

(3) 基因特异性引物:与模板序列互补,适用于序列已知的基因逆转录。

cDNA后续进行PCR扩增长片段,一般用Oligo dT或者基因特异性引物,不建议使用随机引物,因为随机引物是随机结合的,cDNA片段会偏短,可能会对长片段扩增造成稀释,后续扩增不出全长的目的基因;cDNA后续进行qPCR,一般使用Oligo dT和随机引物的混合物,可以避免3’端和5’端的扩增偏好性。

 

Q5:可以通过测逆转产物cDNA浓度判定逆转效率吗?

A5:不可以,逆转录产物cDNA是混合物,除了cDNA产物以外,还有buffer、逆转录酶、引物,同时还包含未转录的模板RNA,总RNA中的tRNA、rRNA等,都会干扰浓度测定结果,因此不能反应真实的cDNA产量。

这是描述信息
上一页
1

品牌故事  Phanta | ClonExpress | Mut Express microRNA

产品
产品
产品
产品

售后服务  服务流程  |  订购流程  |  真伪查询

邮  箱  sales@vazyme.com (销售咨询)
support@vazyme.com (技术支持)
marketing@vazyme.com (市场推广)

举报电话  025-83700665

举报邮箱   jubao@vazyme.com

微信公众号

扫码关注

 地 址:江苏省南京经济技术开发区科创路红枫科技园C2栋   电话:400-600-9335  网站建设: 中企动力 南京

搜索
搜索