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HiScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)
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HiScript II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper)

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R212-01/02
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HiScript® II 1st Strand cDNA Synthesis Kit (+gDNA wiper) 

高效cDNA 一链合成试剂盒(去基因组)

基于高效的HiScript® II Reverse Transcriptase,超强的温度耐受能力确保在高温条件下能打开RNA 复杂二级结构,得到更长的cDNA

宽广的模板起始量范围,从10 pg-5 μg 总RNA,可扩增片段长达15 kb 以上

Anchored Oligo(dT) 23 VN 设计结合位点锚定,特异性高,保证第一链cDNA 合成效率和成功率

针对不同下游应用选择不同的引物,合成的一链cDNA 广泛应用于分子克隆、杂交、PCR 扩增及qPCR 反应等

gDNA wiper Mix 可迅速彻底去除基因组污染

分别投入500ng、50ng、5ng HeLa gDNA 使用Vazyme #R212和Supplier T 中基因组去除模块做清除效率检测,结果显示,相对于竞品,Vazyme #R212 中的4 × gDNA wiper 可清除高达500 ng 的基因组残留,并且清除效率达到99% 以上。

本产品是使用HiScript® II Reverse Transcriptase 从Total RNA或Poly (A) + mRNA 合成一链cDNA 的试剂盒,含有一链cDNA合成所需的全部试剂,HiScript® II Reverse Transcriptase 具有更高的cDNA 合成效率及模板的杂质耐受度,更加适合具有复杂二级结构或低丰度的RNA 模板的逆转录。Anchored Oligo(dT) 23 VN设计结合位点锚定,特异性高,保证第一链cDNA 合成效率和成功率。产品中的4 × gDNA wiper 可在逆转录步骤前快速彻底去除基因组污染,提高实验结果的可信度。

组分

R212-01 50 rxn (20 μl/rxn)

R212-02 100 rxn (20 μl/rxn)

RNase free ddH2O

1 ml

1 ml

4 × gDNA wiper Mix

200 μl

400 μl

10 ×RT Mixa

100 μl

200 μl

HiScript® II Enzyme Mixb

100 μl

200 μl

Oligo (dT)23VN (50 μM)

50 μl

100 μl

Random hexamers (50 ng/μl)

50 μl

100 μl

a. 包含1 mM each dNTP。

b. 包含RNase inhibitor。

-30 ~ -15℃保存。

10 × RT Mix中含有高浓度DTT,低温下可能有沉淀析出。使用前请还原至室温并轻摇混匀,待沉淀重新溶解后使用。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:原核生物RNA能用我们的逆转录试剂吗?

A1:可以。原核生物RNA没有polyA尾,所以在逆转录反应体系中需要以Random primer作为逆转录引物。

Q2:逆转录试剂盒中带有gDNA wiper Mix,可以去除残留在RNA中的基因组。最多可以去除多少的基因组?但如果不进行基因组去除,会影响接下来的逆转录吗?

A2:我们做过100ng基因组的测试,去除效率是99.95%。如果不进行基因组去除不会影响逆转录实验的进行,但是如果基因组残留严重但不去除的话,会影响接下来定量实验的准确性。

Q3:延长逆转录时间,是否可以提高逆转录效率?

A3:对于大多数基因,延长逆转录时间对逆转录效率并没有显著提升;对于一些GC含量较高或含高级结构的模板,延长逆转录时间可提升逆转录效率。

Q4:做了No RT Control发现有gDNA残留怎么办?

A4:如果使用试剂盒中的gDNA wiper模块进行gDNA去除,但No RT Control仍有CT值,可通过实验组和No RT Control组的CT值来判断实验数据是否可用。当实验组CT值与No RT Control对照组CT值差值大于5,说明由gDNA导致的误差小于5%,则可以忽略gDNA污染;若实验组与对照组CT值差值小于3或者几乎一致,则实验组扩增产物的模板很大一部分来源于gDNA,这样的实验组就失去定量意义。

Q5:如何评判RNA质量?

A5:RNA质量从两个方面反应:

(1) RNA完整度。通过琼脂糖凝胶电泳验证RNA完整度。以真核生物为例,完整的总RNA有清晰的三条带,分子量从大到小分别为28S、18S、5S,并且28S是18S亮度的两倍;若能看见三条带,但带型模糊或弥散,则说明RNA有部分降解,此时请立即进行逆转录反应,并适量加大模板量;若只能看见分子量很小的一条带或没有条带,则 RNA 已完全降解,需要重新提取。

(2) RNA的纯度。RNA的纯度可以通过OD260/280和OD260/230两个比值是否在1.8-2.1范围内进行判断,蛋白、离子等残留会使比值降低。

Q6:如何选择逆转录的引物?

A6:根据实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT或基因特异性引物进行逆转录。

(1) 随机引物:随机结合在RNA的任何区域,适用于rRNA、mRNA、tRNA等所有RNA类型的逆转录反应。

(2) Oligo dT:适用于具有PolyA尾的RNA(原核生物RNA、真核生物的rRNA和tRNA不具有PolyA尾)。 由于Oligo dT结合在PolyA尾上,所以对 RNA 样品的质量要求较高,即使有少量的降解也会使全长cDNA合成量大大减少。

(3) 基因特异性引物:与模板序列互补,适用于序列已知的基因逆转录。

cDNA后续进行PCR扩增长片段,一般用Oligo dT或者基因特异性引物,不建议使用随机引物,因为随机引物是随机结合的,cDNA片段会偏短,可能会对长片段扩增造成稀释,后续扩增不出全长的目的基因;cDNA后续进行qPCR,一般使用Oligo dT和随机引物的混合物,可以避免3’端和5’端的扩增偏好性。

Q7:可以通过测逆转产物cDNA浓度判定逆转效率吗?

A7:不可以,逆转录产物cDNA是混合物,除了cDNA产物以外,还有buffer、逆转录酶、引物,同时还包含未转录的模板RNA,总RNA中的tRNA、rRNA等,都会干扰浓度测定结果,因此不能反应真实的cDNA产量。

Liu X ,Wei W,Li X , et al. (2017). BMI1 and MEL18 Promote Colitis-Associated Cancer in Mice via REG3B and STAT3.Gastroenterology.IF:18.392

Ju J, Chen A, Deng Y, et al. (2017).NatD promotes lung cancer progression by preventing histone H4 serine phosphorylation to activate Slug expression.[J]. Nature Communications, 2017, 8(1):928.IF:12.124

Ding W, Liu WQ, Jia Y, et al. (2016). Biosynthetic investigation of phomopsins reveals a widespread pathway for ribosomal natural products in Ascomycetes.PNAS, 113(13):3521-3526. IF:9.674

Wang H, Liang L, Dong Q,et al.(2018)Long noncoding RNA miR503HG, a prognostic indicator, inhibits tumor metastasis by regulating the HNRNPA2B1/NF-κB pathway in hepatocellular carcinoma. Theranostics.IF:8.172

Zhang B, Wang M, Gong A, et al. (2015). HucMSC-exosome mediated -Wnt4 signaling is required for cutaneous wound healing. Stem Cells, 33(7):2158-2168.IF:7.133

Zhang Y, Du J, Zheng J, et al. (2015). EGF-reduced Wnt5a transcription induces epithelial-mesenchymal transition via Arf6-ERK signaling in gastric cancercells. Oncotarget. IF:6.627

Balamurugan S, Wang X, Wang H L, et al. (2017). Occurrence of plastidial triacylglycerol synthesis and the potential regulatory role of AGPAT in the model diatom Phaeodactylumtricornutum[J]. Biotechnology for Biofuels, 2017, 10(1):97.IF:6.444

Wang Y, Huang Y, Xu Y, et al. (2017).A Dual AMPK/Nrf2 Activator Reduces Brain Inflammation after Stroke by Enhancing Microglia M2 Polarization[J]. Antioxidants & Redox Signaling, 2017.IF:6.337

Gu J, Wang D, Zhang J, et al. (2016). GFRalpha2 prompts cell growth and chemoresistance through down-regulating tumor suppressor gene PTEN via Mir-17-5p in pancreatic cancer. Cancer Lett, 380(2), 434-441. IF:5.992

Wang Y, Ruan W, Mi J,et al. (2017).Balasubramide derivative 3C modulates microglia activation via CaMKKβ-dependent AMPK/PGC-1α pathway in neuroinflammatory conditions[J]. Brain Behavior & Immunity, 2017.IF:5.964

Si Z, Liu H, Zhu J, et al.2018Mutation ofSELF-PRUNINGhomologs in cotton promotes short-branching plant architecture:[J]. Journal of Experimental Botany, 2018, 69(10):2543-2553.IF5.83

Zhu J, Chen J, Gao F, et al. 2017Rapid mapping and cloning of the virescent-1 gene in cotton by bulked segregant analysis-next generation sequencing and virus-induced gene silencing strategies.[J]. Journal of Experimental Botany, 2017, 68(15):4125.IF5.83

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