产品订购:sales@vazyme.com

技术支持:support@vazyme.com

购物车中还没有商品,赶紧选购吧!

在线
客服

在线客服服务时间:8:30-17:30

客服
热线

400-600-9335
客服服务热线

关注
微信

诺唯赞生物

关注
微信

诺唯赞资讯

诺唯赞资讯

地 址:江苏省南京经济技术开发区科创路红枫科技园C2栋   电话:400-600-9335    邮箱:sales@vazyme.com

版权所有-南京诺唯赞生物科技有限公司   备案号:苏ICP备12014779号-1   友情链接:南京诺唯赞医疗科技有限公司

诺唯赞生物

南京诺唯赞生物科技有限公司

浏览量:

HiScript Q RT SuperMix for qPCR

货  号:
R122-01
价  格:
¥
1020.00
数  量
-
+
没有此类产品
立即购买
加入购物车
产品详情
FAQ
文献引用
COA报告

HiScript® Q RT SuperMix for qPCR

预混液形式的两步法RT-qPCR 试剂

 即用型的SuperMix 预混液使用方便省时

HiScript® 两步法RT-qPCR 试剂盒以高性价比的HiScript®Reverse Transcriptase 为基础,对反应体系进行大幅简化,即用型的SuperMix 将合成高质量第一链cDNA 所需的所有成分合并为一管5 × SuperMix,只需加入RNA 和水即可进行逆转录反应,RNA 体积最多可加至反应总体积的80%,非常适合于低浓度RNA 模板的逆转录反应,且SuperMix 在-20℃不会冻结,使用方便。

组分

R122-01100 rxn  (20 μl/rxn)

RNase free ddH2O

2 × 1 ml

5 × qRT SuperMixa 

400 μl

5 × No RT Control Mixb

40 μl

a. 包含Buffer、dNTP、HiScript®Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo dT primer mix。

b. 除不含HiScript®Reverse Transcriptase 外,其余成分与5 × qRT SuperMix 相同,用于配制No RT 对照反应。

-20℃保存。

未找到相应参数组,请于后台属性模板中添加

Q1:原核生物RNA能用我们的逆转录试剂吗?

A1:可以。原核生物RNA没有polyA尾,所以在逆转录反应体系中需要以Random primer作为逆转录引物。

Q2:逆转录试剂盒中带有gDNA wiper Mix,可以去除残留在RNA中的基因组。最多可以去除多少的基因组?但如果不进行基因组去除,会影响接下来的逆转录吗?

A2:我们做过100ng基因组的测试,去除效率是99.95%。如果不进行基因组去除不会影响逆转录实验的进行,但是如果基因组残留严重但不去除的话,会影响接下来定量实验的准确性。

Q3:延长逆转录时间,是否可以提高逆转录效率?

A3:对于大多数基因,延长逆转录时间对逆转录效率并没有显著提升;对于一些GC含量较高或含高级结构的模板,延长逆转录时间可提升逆转录效率。

Q4:做了No RT Control发现有gDNA残留怎么办?

A4:如果使用试剂盒中的gDNA wiper模块进行gDNA去除,但No RT Control仍有CT值,可通过实验组和No RT Control组的CT值来判断实验数据是否可用。当实验组CT值与No RT Control对照组CT值差值大于5,说明由gDNA导致的误差小于5%,则可以忽略gDNA污染;若实验组与对照组CT值差值小于3或者几乎一致,则实验组扩增产物的模板很大一部分来源于gDNA,这样的实验组就失去定量意义。

Q5:如何评判RNA质量?

A5:RNA质量从两个方面反应:

(1) RNA完整度。通过琼脂糖凝胶电泳验证RNA完整度。以真核生物为例,完整的总RNA有清晰的三条带,分子量从大到小分别为28S、18S、5S,并且28S是18S亮度的两倍;若能看见三条带,但带型模糊或弥散,则说明RNA有部分降解,此时请立即进行逆转录反应,并适量加大模板量;若只能看见分子量很小的一条带或没有条带,则 RNA 已完全降解,需要重新提取。

(2) RNA的纯度。RNA的纯度可以通过OD260/280和OD260/230两个比值是否在1.8-2.1范围内进行判断,蛋白、离子等残留会使比值降低。

Q6:如何选择逆转录的引物?

A6:根据实验的具体情况选择随机引物、Oligo dT或基因特异性引物进行逆转录。

(1) 随机引物:随机结合在RNA的任何区域,适用于rRNA、mRNA、tRNA等所有RNA类型的逆转录反应。

(2) Oligo dT:适用于具有PolyA尾的RNA(原核生物RNA、真核生物的rRNA和tRNA不具有PolyA尾)。 由于Oligo dT结合在PolyA尾上,所以对 RNA 样品的质量要求较高,即使有少量的降解也会使全长cDNA合成量大大减少。

(3) 基因特异性引物:与模板序列互补,适用于序列已知的基因逆转录。

cDNA后续进行PCR扩增长片段,一般用Oligo dT或者基因特异性引物,不建议使用随机引物,因为随机引物是随机结合的,cDNA片段会偏短,可能会对长片段扩增造成稀释,后续扩增不出全长的目的基因;cDNA后续进行qPCR,一般使用Oligo dT和随机引物的混合物,可以避免3’端和5’端的扩增偏好性。

Q7:可以通过测逆转产物cDNA浓度判定逆转效率吗?

A7:不可以,逆转录产物cDNA是混合物,除了cDNA产物以外,还有buffer、逆转录酶、引物,同时还包含未转录的模板RNA,总RNA中的tRNA、rRNA等,都会干扰浓度测定结果,因此不能反应真实的cDNA产量。

Zhou H, Liu J, Zhou C, et al. In vivo simultaneous transcriptional activation of multiple genes in the brain using CRISPR-dCas9-activator transgenic mice.[J]. Nature Neuroscience, 2018.IF17.839

Guo M, Li C, Lei Y, et al. (2016). Role of the adipose PPARγ-adiponectin axis in susceptibility to stress and depression/anxiety-related behaviors.Mol Psychiatry.IF:13.3

Yang L, Wang W H, Qiu W L, et al. A single-cell transcriptomic analysis reveals precise pathways and regulatory mechanisms underlying hepatoblast differentiation.[J]. Hepatology, 2017, 66(5):1387.IF13.246

Wang Y, Tang Z, Huang H, et al. Pulmonary alveolar type I cell population consists of two distinct subtypes that differ in cell fate[J]. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America, 2018, 115(10):2407.IF9.661

Jin S, Tian S, Chen Y, et al. (2016). USP19 modulates autophagy and antiviral immune responses by deubiquitinating Beclin-1. The EMBO Journal, 35(8):866-880. IF:9.643

Li J, Wang Z, Chu Q, et al. The Strength of Mechanical Forces Determines the Differentiation of Alveolar Epithelial Cells.[J]. Developmental Cell, 2018, 44(3):297.IF9.174

Liu T, Tang Q, Liu K, et al. (2016). TRIM11 Suppresses AIM2 Inflammasome by Degrading AIM2 via p62-Dependent Selective Autophagy.[J]. Cell Reports, 16(7):1988. IF:7.87

Chai Q, Shang X, Wu S, et al. (2017). 5-aminolevulinic acid dehydratase gene dosage affects programmed cell death and immunity[J]. Plant Physiology, 2017:pp.00816.2017.IF:6.456

Hui W, Huo X, Yang X R, et al.(2017).  STAT3-mediated upregulation of lncRNA HOXD-AS1 as a ceRNA facilitates liver cancer metastasis by regulating SOX4[J]. Molecular Cancer, 2017, 16(1):136. IF:6.204

Ni M, Ma W, Wang X, et al. (2017). Next generation transgenic cotton pyramiding RNAi and Bt counters insect resistance.[J]. Plant Biotechnology Journal,.IF:6.09

Zhang Y, Du J, Zheng J, et al. (2015). EGF-reduced Wnt5a transcription induces epithelial-mesenchymal transition via Arf6-ERK signaling in gastric cancercells. Oncotarget, 6(9):7244-7261. IF:6.627

Hu W, Zhu L, Yang X, et al. (2016). The epidermal growth factor receptor regulates cofilin activity and promotes transmissible gastroenteritis virus entry intointestinal epithelial cells. Oncotarget, 7(11):12206-12221. IF:6.359

Han YC, Kuang JF, Chen JY, et al. (2016). Banana Transcription Factor MaERF11 Recruits Histone Deacetylase MaHDA1 and Represses the Expression of MaACO1 and Expansins during Fruit Ripening. Plant Physiol, 171(2):1070-1084. IF:6.28

Shi S, Wang T, Chen Z, et al. (2016). OsHAC1;1 and OsHAC1;2 Function as Arsenate Reductases and Regulate Arsenic Accumulation. Plant Physiol, 172(3), 1708-1719. IF:6.28

Chen J, Fan X, Qian K, et al.(2017).pOsNAR2.1:OsNAR2.1 expression enhances nitrogen uptake efficiency and grain yield in transgenic rice plants.[J]. Plant Biotechnology Journal, IF:6.09

Niu YF, Wang X, Hu DX, et al. (2016). Molecular characterization of a glycerol-3-phosphate acyltransferase reveals key features essential for triacylglycerolproduction in Phaeodactylumtricornutum. Biotechnology for Biofuels, 9:60. IF:6.044

暂未实现,敬请期待
暂未实现,敬请期待
暂时没有内容信息显示
请先在网站后台添加数据记录。