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高效无缝克隆,一步轻松搞定!

 ClonExpress® II One Step Cloning Kit

 

 

l 简单、快速、高效,适用于任何载体

l 不依赖于连接酶,无载体自连现象,阳性率可达95%以上

l 可高效克隆50 bp-10 kbp DNA片段

l 线性化克隆载体和PCR产物可不进行纯化直接克隆

l 无需考虑插入片段自身携带的酶切位点

 
 
 

 

 

克隆效率极高

图1. 重组产物转化后平板上一般可形成数千个单克隆,而无插入片段的阴性对照反应转化后只有数个单克隆形成。因此ClonExpress系统的自连背景会大大降低连接酶依赖的克隆方式。
 
 
 
 
 
克隆阳性率95%以上
 
 图2. 鉴定酶切结果表明,克隆阳性率可达95%以上。
 
  
 
 
       ClonExpress® II是新一代的重组克隆试剂盒,包含增强的重组酶Exnase® II,可以显著提高重组克隆效率。首先将载体进行线性化,并在插入片段PCR引物5'-端引入线性化载体的末端序列,使得PCR产物5'和3'最末端分别带有和线性化载体两末端一致的序列(15bp~20bp)。这种两端带有载体末端序列的PCR产物和线性化载体按一定比例混合后,在Exnase® II的催化下,反应30 min即可进行转化,完成定向克隆,阳性率可达95%以上。
 

 

引物设计原理


 
 
图3. 插入片段扩增引物设计方式示意
ClonExpress 系统的引物设计方式可概括为15bp载体序列+完整的酶切位点+基因特异序列。
 
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