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  • 产品名称: Vazyme LAmp DNA Polymerase (Mg2+ plus Buffer)
  • 产品编号: P301-01/02
    • 产品规格: 125 U 500 U

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长距离PCR的明灯!

Vazyme LAmp® DNA Polymerase (Mg2+ plus Buffer)

 

高效扩增>20 kb的基因组、cDNA片段

极高的扩增灵敏度

对于低纯度模板具有很强的耐受度

广泛的GC适应性

提供即用型的预混液,最大程度地减少实验步骤

 

  

扩增效率高

可以高效扩增>20 kb的基因组、cDNA片段

 

图1.  基因组扩增性能

以10 ng不同种属的基因组DNA为模板,用Vazyme LAmp® DNA Polymerase扩增长度为3.6-21.0 kb的目的片段。

M. DL15000 Marker(货号:MD103-01/02)

 

 

 

图2.  cDNA扩增性能

以1 μg HeLa细胞总RNA或小鼠骨骼肌细胞总RNA (for Nebulin)为模板,用Hiscript® II 1st strand cDNA synthesis kit (R211-01)进行逆转录。

取1 μl cDNA为模板,用Vazyme LAmp® DNA Polymerase扩增。M.DL15000 Marker(货号:MD103-01/02)

 

 

 

 

 

扩增灵敏度高。可以检测到1 ng以下的基因组模板

以500 ng-0.5 ng人基因组或棉花基因组DNA为模板,用Vazyme LAmp® DNA Polymerase分别扩增11.5 kb或17.2 kb片段。

 

Vazyme LAmp® DNA Polymerase可以检测到1 ng以下的基因组模板。

M.DL15000 Marker(货号:MD103-01/02)

 

 

 

 

 •耐受度强,对粗制模板的扩增效率高

图4.  对粗制模板的良好耐受度. 在96孔板中进行HeLa细胞基因组粗提取。细胞裂解后,不经过酚氯仿抽提,直接加入NaCl-乙醇溶液使核酸自然沉淀。用70%乙醇洗涤,晾干后,用30 μl TE溶解。

取1 μl为模板 (相当于约1000个细胞),用Vazyme LAmp® DNA Polymerase分别扩增三种不同长度的片段。Vazyme LAmp® DNA Polymerase对粗制模板的扩增效率高于市面上常见的其它品牌的同类产品。

M.DL15000 Marker(货号:MD103-01/02)

 

 

 

 

广泛的GC含量适应性。可以扩增GC含量27%至78%的不同片段

图5.  广泛的GC含量适应性. 以10 ng的人基因组为模板,用Vazyme LAmp® DNA Polymerase分别扩增GC含量27%至78%的不同片段。

 

*扩增时加入PCR Enhancer (P021-01)。

 

 

       在长片段PCR过程中,Taq酶由于缺乏3’→5’外切酶活性(校对活性),不能切除掺入的错配核苷酸,因此会在错配处停滞,导致扩增延宕。Vazyme LAmp® DNA Polymerase由Taq DNA Polymerase与一种含有校对活性的蛋白按特定比例混合而成,极大提高了扩增效率,并且将保真度提高至Taq酶的6倍。配合优化的缓冲体系,Vazyme LAmp®DNA Polymerase可高效扩增超过20 kb的基因组、cDNA片段,并且对于低拷贝、低纯度、以及不同GC含量的模板都具有很高的成功率。无论是首次进行PCR实验,还是挑战高难度的扩增,Vazyme LAmp® DNA Polymerase都是您最可靠的选择。PCR产物的3’端带A,可克隆至T载体,并适用于ClonExpress®快速克隆系统(C112/113/114)。提供含红色染料的2 × Mix,只需加入引物和模板即可进行扩增,提高了通量和结果的重现性。不用对反应进行优化,即可获得与独立组分形式的Vazyme LAmp® DNA Polymerase一样好的结果,并且扩增结束后即可直接进行电泳。

产品名称

规格

货号

组分

Vazyme LAmp® DNA Polymerase (Mg2+ plus Buffer)

125 U/500 U

P301-01/02

110 × Vazyme LAmp® Buffer (Mg2+ plus)

2Vazyme LAmp® DNA Polymerase (5 U/μl)

35 × PCR Enhancer

410 × Loading buffer

Vazyme LAmp® DNA Polymerase (Mg2+ plus Buffer, with dNTP)

125 U/500 U

P301-d1/d2

110 × Vazyme LAmp® Buffer (Mg2+ plus)

2Vazyme LAmp® DNA Polymerase (5 U/μl)

3dNTP Mix (10 mM each)

45 × PCR Enhancer

510 × Loading buffer

Vazyme LAmp® DNA Polymerase (Mg2+ free Buffer)

125 U/500 U

P302-01/02

110 × Vazyme LAmp® Buffer (Mg2+ free)

225 mM MgCI2

3Vazyme LAmp® DNA Polymerase (5 U/μl)

45 × PCR Enhancer

510 × Loading buffer

Vazyme LAmp® DNA Polymerase (Mg2+ free Buffer, with dNTP)

125 U/500 U

P302-d1/d2

110 × Vazyme LAmp® Buffer (Mg2+ free)

225 mM MgCI2

3Vazyme LAmp® DNA Polymerase (5 U/μl)

4dNTP Mix (10 mM each)

55 × PCR Enhancer

610 × Loading buffer

2 ×Vazyme LAmp® Master Mix

1 ml/5 ml/15 ml

P311-01/02/03

2 × Vazyme LAmp® Master Mix

2 × Vazyme LAmp® Master Mix (Dye Plus)

1 ml/5 ml/15 ml

P312-01/02/03

2 × Vazyme LAmp ® Master Mix (Dye Plus)

 

贮藏与保质期:

-20 ℃保存。

常见问题及解决方案

(1) 不出现扩增条带
a)、引物设计有误:核对引物设计方案。
b)、扩增体系配制错误:重复实验。
c)、扩增反应条件不优化:调整Mg2+浓度、酶量、扩增程序。
d)、模板质粒质量偏差:长期放置、反复冻融会导致模板质粒断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的质粒作为模板。
e)、模板的GC含量:GC含量过高会导致DNA的双链无法完全打开,此时加入PCR Enhancer(货号P021)可以有效降低解链温度;GC含量过低会导致扩增效率较差,可适当延长引物长度或通过TD PCR摸索合适的反应条件。
(2)出现非特异性扩增带
a)、引物设计不够优化:引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体,可降低引物浓度进行优化,必要时重新设计引物。
b)、模板不纯:模板被污染,需重新制备模板。
c)、试验条件不够优化:如果出现比目的条带小的杂带,可通过提高退火温度、降低循环数调整;如果出现比目的条带大的杂带,可缩短延伸时间、降低循环数;另外,可降低Mg2+及酶的浓度。
(3)条带弥散或拖尾
a)、模板降解或过量:可通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新纯化模板,对于简单模板(例如质粒、λDNA),每50ul反应使用1pg-10ng DNA;对于复杂模板(例如基因组、cDNA),每50ul反应使用1ng-1ug DNA。
b)、酶量加太多:如高保真系列:50ul反应体系加1U,Taq系列:50ul体系加2U。
(4)条带很暗
a)、增加模板量,提高循环数。
b)、多扩几管,胶回收浓缩。
(5) 产物有错配
a)、检查原始模板是否原本就是突变或错配的。
b)、少量序列存在非严谨序列,有相似重组序列,导致重组错位。
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