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  • 产品名称: Champagne Taq DNA Polymerase
  • 产品编号: P122-d1/d2/d3
    • 产品规格: 500 U (2.5 U/µl) 500 U (5 U/µl) 500 U (10 U/µl)

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分子诊断首选热启动Taq酶

Champagne TaqTM DNA Polymerase

 

快速失活。95°C加热30秒即可完全失活,释放Taq DNA polymerase活性

具有极高的扩增灵敏度和特异性。非常适合于从复杂模板 (基因组,cDNA)中扩增低拷贝基因

对各种PCR/qPCR体系具有极佳的兼容性

 

 

高度的特异性和检测灵敏度

图1. 以1 ng-31.25 pg小鼠基因组为模板,用Champagne TaqTM DNA Polymerase和Taq DNA Polymerase扩增tPA基因300 bp片段。

混样后立刻开始PCR反应 (0 h),或者在55℃放置24小时后再开始PCR反应。

可以看到,Champagne TaqTM DNA Polymerase可以保证高度的特异性,而且检测灵敏度可以达到31.25 pg 基因组(相当于10拷贝)。

M,DL2000 Marker(货号MD101-01/02);1-6,1 ng-31.25 pg两倍稀释的小鼠基因组;7,NTC (无模板对照)。

 

 

 

 

  •  

  • 低模板量扩增

图2. 以2 pg HeLa细胞总RNA为模板,用Champagne TaqTM DNA Polymerase和Taq DNA Polymerase做探针法one step RT-qPCR扩增CTNNB1基因,各设置8个重复。

可以看到,在低模板量下普通Taq酶几乎不能正常扩增,而Champagne TaqTM DNA Polymerase扩增信号正常,且检出率达到100% (8/8检出)。

 

 

 

 

      Champagne TaqTM DNA Polymerase是由Champagne TaqTM antibody与Taq酶经过最佳比例混合得到的热启动Taq酶。基于Champagne TaqTM antibody的热稳定特性,Champagne TaqTM DNA Polymerase在55℃下仍可保持严谨的封闭性,使得在混样和体系升温阶段非特异扩增被抑制到最低程度。当反应升温至95℃ 30s以上时,Champagne TaqTM antibody彻底失活,Taq酶活性被完全释放,保证了PCR体系具有最高的扩增效率和灵敏度。 与化学修饰的热启动Taq酶相比,Champagne TaqTM DNA Polymerase的激活不受缓冲液pH、离子强度等因素的影响,因此具有更好的PCR体系兼容性,是基于PCR/qPCR的分子诊断试剂的首选用热启动Taq酶。

 

产品组

组分

P122-d1 500 U (2.5 U/µl)   P122-d2 500 U(5 U/µl) P122-d3 500U (10 U/µl)

10 × Champagne TaqTM Buffer (Mg2+ plus)

 

2 ml
2 ml
2 ml
  dNTP Mix (10 mM each) 
 
400 µl
 
400 µl
 
400 µl
 Champagne TaqTM DNA Polymerase(2.5 U/µl) 
 
200 µl
------ ------
Champagne TaqTM DNA Polymerase(5 U/µl) ------
 
100 µl
------
Champagne TaqTM DNA Polymerase(10 U/µl) ------ ------
 
50 µl

 

贮藏与保质期:

-20 ℃保存。

常见问题及解决方案

(1) 不出现扩增条带
a)、引物设计有误:核对引物设计方案。
b)、扩增体系配制错误:重复实验。
c)、扩增反应条件不优化:调整Mg2+浓度、酶量、扩增程序。
d)、模板质粒质量偏差:长期放置、反复冻融会导致模板质粒断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的质粒作为模板。
e)、模板的GC含量:GC含量过高会导致DNA的双链无法完全打开,此时加入PCR Enhancer(货号P021)可以有效降低解链温度;GC含量过低会导致扩增效率较差,可适当延长引物长度或通过TD PCR摸索合适的反应条件。
(2)出现非特异性扩增带
a)、引物设计不够优化:引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体,可降低引物浓度进行优化,必要时重新设计引物。
b)、模板不纯:模板被污染,需重新制备模板。
c)、试验条件不够优化:如果出现比目的条带小的杂带,可通过提高退火温度、降低循环数调整;如果出现比目的条带大的杂带,可缩短延伸时间、降低循环数;另外,可降低Mg2+及酶的浓度。
(3)条带弥散或拖尾
a)、模板降解或过量:可通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新纯化模板,对于简单模板(例如质粒、λDNA),每50ul反应使用1pg-10ng DNA;对于复杂模板(例如基因组、cDNA),每50ul反应使用1ng-1ug DNA。
b)、酶量加太多:如高保真系列:50ul反应体系加1U,Taq系列:50ul体系加2U。
(4)条带很暗
a)、增加模板量,提高循环数。
b)、多扩几管,胶回收浓缩。
(5) 产物有错配
a)、检查原始模板是否原本就是突变或错配的。
b)、少量序列存在非严谨序列,有相似重组序列,导致重组错位。
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