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  • 产品名称: AceTaq DNA Polymerase
  • 产品编号: P401-d1/d2/d3
    • 产品规格: 250 U 1000 U 3000 U

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化学修饰热启动Taq酶, 提供最高的严谨性
AceTaq® DNA Polymerase


采用化学修饰,80℃以下完全封闭酶活

95℃加热5分钟即可释放活性

适用于从复杂模板(基因组, cDNA)中扩增低拷贝基因

提供即用型的预混液,最大程度地减少实验步骤

 

 

 

与Taq相比,对于低拷贝的基因模板适应性更强

图1. 模板适应性评价

以10 ng人胎盘总RNA进行逆转录。将所得cDNA的1/10作为模板,分别用Taq和AceTaq扩增EGFR, IFN8R, IL-8, ILGF-1, p53基因。35个循环后,取1/4 PCR产物进行电泳。可以看出,对于中等拷贝数的IFN8R, IL-8和p53基因,热启动的AceTaq可极大提高特异性和产量;对于低拷贝的EGFR和ILGF-1基因,只有用AceTaq才能实现扩增。

M: DNA Marker

 

 

 

 

图2.  灵敏度评价

Lane 1, DNA Marker;

Lane 2-8, 640 pg-10 pg人基因组DNA 2倍稀释梯度;

Lane 9, NTC (No Template Control).

 

 

      AceTaq®DNA Polymerase是经过化学修饰的Taq DNA Polymerase,在温度低于80℃时活性被完全封闭,可防止在样品准备及反应升温阶段产生非特异扩增和引物二聚体。 只有经过95℃加热后活性才被释放。与其它热启动方法相比, AceTaq® DNA Polymerase具有最高的严谨性;与现有化学修饰的热启动Taq酶相比, AceTaq® DNA Polymerase的激活只需要5分钟,兼容现有的PCR程序。AceTaq® DNA Polymerase配合优化的缓冲体系,可最大程度的减少非特异扩增和引物二聚体,带来最高的灵敏度,非常适合于从复杂模板(基因组,cDNA)中扩增低拷贝基因。PCR产物的3’端带A,可克隆至T载体,并适用于ClonExpress®快速克隆系统(C112/113/114)。 2 × Master Mix包含AceTaq® DNA Polymerase,dNTP以及优化的缓冲体系,只需加入引物和模板即可进行扩增,减少了移液操作,提高了通量和结果的重现性。含染料的Master Mix可在PCR反应结束后直接进行电泳。

产品名称

规格

货号

组分

AceTaq®  DNA Polymerase (with dNTP)

250 U/1,000U /3,000 U

P401-d1/d2/d3

110 × AceTaq® Buffer (Mg2+ Plus)

2dNTP Mix (10 mM each)

3AceTaq® DNA Polymerase (5 U/μl)

2 × AceTaq®  Master Mix

1 ml/5 ml/15 ml

P411-01/02/03

2 × AceTaq® Master Mix

2 × AceTaq®  Master Mix (Dye Plus)

1 ml/5 ml/15 ml

P412-01/02/03

2 × AceTaq® Master Mix (Dye Plus)

常见问题及解决方案

(1) 不出现扩增条带
a)、引物设计有误:核对引物设计方案。
b)、扩增体系配制错误:重复实验。
c)、扩增反应条件不优化:调整Mg2+浓度、酶量、扩增程序。
d)、模板质粒质量偏差:长期放置、反复冻融会导致模板质粒断裂、开环或降解,应使用新鲜制备的质粒作为模板。
e)、模板的GC含量:GC含量过高会导致DNA的双链无法完全打开,此时加入PCR Enhancer(货号P021)可以有效降低解链温度;GC含量过低会导致扩增效率较差,可适当延长引物长度或通过TD PCR摸索合适的反应条件。
 
(2)出现非特异性扩增带
a)、引物设计不够优化:引物与靶序列有非特异性互补或自身聚合成二聚体,可降低引物浓度进行优化,必要时重新设计引物。
b)、模板不纯:模板被污染,需重新制备模板。
c)、试验条件不够优化:如果出现比目的条带小的杂带,可通过提高退火温度、降低循环数调整;如果出现比目的条带大的杂带,可缩短延伸时间、降低循环数;另外,可降低Mg2+及酶的浓度。
 
(3)条带弥散或拖尾
a)、模板降解或过量:可通过电泳检查模板完整性及浓度,必要时重新纯化模板,对于简单模板(例如质粒、λDNA),每50ul反应使用1pg-10ng DNA;对于复杂模板(例如基因组、cDNA),每50ul反应使用1ng-1ug DNA。
b)、酶量加太多:如高保真系列:50ul反应体系加1U,Taq系列:50ul体系加2U。
 
(4)条带很暗
a)、增加模板量,提高循环数。
b)、多扩几管,胶回收浓缩。
 
(5) 产物有错配
a)、检查原始模板是否原本就是突变或错配的。
b)、少量序列存在非严谨序列,有相似重组序列,导致重组错位。
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