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  • 产品名称: One Step Mouse Genotyping Kit
  • 产品编号: PD101-01
    • 产品规格: 200 rxn

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快速对动物组织进行PCR

One Step Mouse Genotyping Kit

 

基于蛋白酶K的特制裂解液

裂解产物直接用于PCR扩增,无需提取基因组

广泛适用于2kb以内目标片段扩增,并适用于4对引物以内的多重PCR反应  

 

图1. 使用One Step Mouse Genotyping Kit以同一个粗提样品为模版,扩增17个不同的基因(长度为200 bp~800 bp之间)。所有片段均可以实现特异性高产量扩增。

 

      本试剂盒包含整套的DNA粗提取以及PCR扩增体系,适用于小鼠基因型快速鉴定(Rapid Genotyping)。本试剂盒可用于从小鼠尾巴、耳朵以及脚趾等组织中快速释放基因组DNA,产物可直接进行PCR扩增,无需匀浆、破碎、过夜消化、酚氯仿抽提、DNA沉淀或柱式纯化等操作,极大缩短了实验耗时。使用时,将组织浸泡在预添加了Proteinase K的裂解液中,55 ℃孵育20 min再95 ℃加热5 min灭活Proteinase K。裂解产物经离心后可直接用做PCR扩增模板,经反复测试广泛适用于2 kb以内目标片段扩增,并适用于4对引物以内的多重PCR反应。试剂盒中配有2 × Taq Plus Master Mix(Dye Plus)(P212),包含高性能的Taq Plus DNA Polymerase,dNTP以及优化的缓冲体系。PCR反应时只需加入引物和模板即可进行扩增,减少了开管/移液等操作,显著降低了样品交叉污染并且提高了检测通量和结果的重现性。独特的保护剂使得Taq Plus Master Mix经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。体系中预混有电泳缓冲液和染料,可在反应结束后直接进行电泳,使用方便快捷。

产品组分

组分 PD101-01 200 rxn (50 μl/rxn)
1 × Mouse tissue Lysis Buffer 40 ml
Proteinase K 800 μl
2 × Taq Plus Master Mix (Dye Plus) 5 ml
25 mM MgCl2 500 μl
5 × PCR Enhancer 2 ml

 

储存条件:

1 × Mouse tissue Lysis Buffer 4℃保存;其余组分-20℃保存。

常见问题及解决方案

(1)扩增产量低或者无法扩增
1. 组织中的一些PCR抑制物混入裂解液中:可尝试将裂解产物稀释10倍后再进行PCR扩增;
2. DNA释放效率较差:可尝试延长55 ℃孵育时间至3小时;
3. Proteinase K没有充分灭活:灭活步骤在沸水浴中进行;
4. PCR循环数不够:一般而言, 30~35个循环已经足以扩增足量的产物。然而对于某些片段,提高循环数可以获得更好的扩增效果;
5. 扩增反应退火温度设置太高:降低退火温度 (每次降低3 ℃);
6. PCR引物错误:设置以纯化过的小鼠基因组为模板的阳性对照反应。
(2) 非特异性产物很多
1. PCR反应体系在室温下配制:在冰水浴中配制反应体系可显著降低非特异性扩增;
2. 扩增反应退火温度设置太低:提高退火温度 (每次提高2 ℃);
3. PCR引物错配严重:重新设计引物。
(3)阴性对照也出现扩增
PCR反应体系出现污染:逐个更换组织裂解体系、
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