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  • 产品名称: HiScript II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit
  • 产品编号: Q223-01
    • 产品规格: 250 rxn

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HiScript® II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit

包含dUTP/UDG防污染系统的探针一步法qRT-PCR

 

热不稳定(Heat-labile)的UDG酶室温下迅速降解含U的双链DNA污染物

• 热不稳定(Heat-labile)的UDG酶在55℃迅速彻底失活,维持cDNA的完整性

• 可检测到个位数拷贝的模板或0.1 pg总RNA

支持多重探针检测

 

图1.HiScript® II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit (Q223)提供良好的检测灵敏度和线性关系。

以Hela细胞总RNA为模板,用HiScript® II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit (Q223) 扩增RFLPO 基因。由图可见,优化的dUTP浓度以及Heat-labile UDG使得扩增效率和灵敏度不会受到影响。相比之下,E.coli来源的UDG会严重影响one step RT-qPCR的检测灵敏度。

图2.dUTP/UDG防污系统原理示意图

 

dUTP/UDG防污染系统是一种非常有效的控制PCR扩增产物污染的手段。在以DNA为模板的PCR检测试剂中,已逐渐成为了一种强制标准。不过,常用的E. coli UDG在通常的逆转录温度 (42-55℃) 下仍具有较高的活性,会降解cDNA,导致One Step RT-PCR/qPCR的灵敏度降低。HiScript® II U+ One Step qRT-PCR Probe Kit含有比例优化的dUTP/dNTP mix,并加入了来源于嗜冷海洋细菌的Heat-labile UDG。Heat-labile UDG在室温下具有很高的活性,在反应体系混合过程中即可充分降解含U的双链DNA污染物。当反应体系升温至50-55℃ (HiScript® II的最适反应温度) 时,Heat-labileUDG迅速彻底失活,维持cDNA的完整性,保证检测灵敏度不受影响。

组分说明:

组分

Q223-01 250 rxn (20 μl/rxn)

RNase free ddH2O

2×1.25 ml

2×One Step UMixa

2×1.25 ml

One Step UEnzyme Mixb

250 μl

50×ROX Reference Dye 1c

100 μl

50×ROX Reference Dye 2c

100 μl

a. 包含dNTP Mix, Mg2+ ,缓冲液

b. 包含HiScript® II Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、UDG以及Champagne TaqTM DNA Polymerase

c. 用以校正孔与孔之间产品的荧光信号误差。使用ABI 7900HT/7300 Real-Time PCR System和StepOne PlusTM时使用50×ROX Reference Dye 1;ABI 7500,7500 Fast Real-Time PCR System, Stratagene Mx3000P使用50×ROX Reference Dye 2;Roche, Bio-Rad的Real-Time PCR仪不必使用ROX。

 

质量控制

所有组分经检测均无核酸外切酶、核酸内切酶及RNase残留。

 

功能测试:以HeLa细胞总RNA为模板,1 pg-1 μg起始量的6个浓度梯度,扩增B2M基因。扩增效率在0.95-1.05之间,且模板量为1 pg时CT值在35以内。

注意事项

1. One Step U+ Enzyme Mix 含有高浓度的甘油,使用前请短暂离心,收集到反应管底部,并用移液枪轻轻吸打,充分混匀后准确吸取。

 

2. 反应液的配制请使用RNase-free 枪头,EP 管等,尽量避免污染。

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