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  • 产品名称: Discover-sc Single Cell Kit V2
  • 产品编号: N602-01/02
    • 产品规格: 24 rxn 96 rxn

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Discover-sc Single Cell Kit V2

 

  • 高灵敏度

    能够以单个细胞或者极微量的基因组样本为模板实现全基因组无差别扩增。

  • 高覆盖度

    单细胞基因组经扩增后可达到95%以上的覆盖度。

  • 高均一度

    基于无偏好性MDA的扩增,可实现全基因组的均一扩增。

  • 高保真度

    Phi29 DNA聚合酶具有优于目前绝大多数高保真酶的保真度。

  • 高产量

    6-8小时的反应可以产生30-40 µg的基因组DNA。

 

扩增产物的广泛适应性

Discover-scTM Single Cell Kit V2扩增产物分布在2-100kb,平均产物长度大于20kb,广泛适用于全基因组和外显子测序、大片段拷贝数变异分析、微卫星分析、qPCR分析、基因芯片分析。

 

MDL15000

 

C单细胞基因组扩增产物

 

D:纯化基因组扩增产物

 

 

 

 

扩增产物的高覆盖度!高均一度!

Discover-scTM Single Cell Kit V2全基因组扩增产物均一度与覆盖度检测结果。

使用分布在16条不同染色体上的qPCR引物检测Discover-sc Single Cell Kit V2全基因组扩增产物的均一度与覆盖度,其中模板为5ng。结果显示扩增产物的高均一度与覆盖度。

 

     Discover-scTM Single Cell Kit V2使用基于多重链置换扩增(MDA)的等温扩增体系,可以以单个细胞或者极少量样本为模板实现全基因组的无差别扩增。单细胞基因组经扩增后可达到95%以上的覆盖度,扩增产物大小在2kb-100kb之间,平均产物长度大于20 kb,广泛适用于全基因组和外显子测序、大片段拷贝数变异分析、微卫星分析、qPCR分析、基因芯片分析。

     本试剂盒使用的Phi 29 DNA聚合酶是从噬菌体中克隆的DNA聚合酶,具有很强的链置换活性,可以实现复杂结构的DNA解链与复制,并且Phi 29 DNA聚合酶具有很强的链亲合力,单次聚合反应可以实现长达100 kb的连续聚合延伸,其扩增产物适用于几乎所有下游应用;Phi 29 DNA聚合酶还具有很强的3’-5’外切酶活性,其保真度是Taq酶的1000倍,这保证了DNA合成的高保真性。

     正常情况下Discover-scTM Single Cell KitV2一个反应可以产生30-40 μg高覆盖度的基因组DNA。

1. 没有扩增产物

A. 样品在收集过程中丢失

重新收集样品,确定不会因操作不当,造成样品意外丢失。

B.基因组DNA样本中含有反应抑制成分

纯化或者稀释DNA样品。如果样品纯化过程中有乙醇沉淀或漂洗步骤,样品中残留的酒精会抑制反应,纯化过程中要让酒精充分挥发。

C.反应温度过高

反应温度应控制在30℃,过高的温度会使聚合酶失活,如果使用具有热盖功能的PCR仪进行反应,请将热盖温度设为70℃。

 

2.扩增产生10-40 μg DNA,但检测到部分染色体错位或等位基因丢失。

A.对于以基因组DNA为起始模板的反应:

基因组DNA存在降解,使用完整的DNA作为模板;使用更多量的DNA做为模板。

B.对于以细胞作为起始的反应:

细胞存在凋亡或者细胞被固定过导致DNA降解;细胞存在难以被裂解的细胞壁(如植物细胞)不适合直接作为起始材料。

 

3.阴性对照扩增产生10-40 μg DNA,但下游检测结果为阴性(如qPCR)

无模板的阴性对照反应中,由引物的随机聚合延伸产生的高分子量DNA产物,这种产物不影响目的产物的质量及下游分析。

 

4.阴性对照扩增产生10-40 μg DNA,且下游检测结果为阳性(如qPCR)。

反应有交叉污染,由于本反应对微量DNA非常敏感,替换掉所有可能被DNA污染的试剂及用品。

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