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  • 产品名称: HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit
  • 产品编号: R111-01/02
    • 产品规格: 50 rxn(20 μl/rxn) 100 rxn(20 μl/rxn)

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HiScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit

 

HiScript® Reverse Transcriptase提供可靠的逆转录表现

宽泛的模板量范围,从1 pg-2.5 μg总RNA

以预混液形式提供,提高实验的简便性,减少混样误差

 

      HiScript® 第一链cDNA合成试剂盒基于HiScript® Reverse Transcriptase,包含合成高质量第一链cDNA所需的所有成分,适合于后续的PCR、qPCR以及PCR克隆。2 × RT Mix包含优化的缓冲体系和dNTP;Enzyme Mix包含HiScript® Reverse Transcriptase和RNase inhibitor。可根据需要,选择Oligo (dT)18或Random hexamers作为逆转录引物。

常见问题及解决方案

1.防止RNase污染 :保持实验区域洁净;操作时需穿戴干净的手套、口罩;实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase free。

2.引物选择

(1)后续实验为PCR

如果模板为真核生物来源,一般情况下首选Oligo (dT)18,与真核生物mRNA的3’ Poly A尾配对,可获得最高产量的全长cDNA。

基因特异性引物 (GSP)的特异性最高。但有些情况下,用于PCR反应的GSP无法有效引导第一链cDNA合成。这时,可改用Oligo (dT)18或 Random hexamers重新进行逆转录。

Random hexamers特异性最低,所有RNA,包括mRNA, rRNA, tRNA均可以作为Random hexamers的模板。当目标区域具有复杂二级 结构或GC含量较高,或者模板为原核生物来源,使用Oligo (dT)18或基因特异性引物 (GSP)无法有效引导cDNA合成时,可使用Random hexamers为引物。

(2)后续实验为qPCR

将Oligo (dT)18与Random hexamers混合使用,可使mRNA的各个区域均能以相同效率引发cDNA合成,有助于提高定量结果的重复性。

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